[發(fā)明專(zhuān)利]一種引起大豆根腐病的鐮孢菌屬菌種的鑒定與區(qū)分方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810342128.4
• 申請(qǐng)日: 2018-04-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108277296A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-07-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉世名;鄭娜;張劉萍;彭德良
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/6895
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/6895;C12Q1/686;C12Q1/04
• 代理公司: 北京兆君聯(lián)合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11333
• 代理人: 胡敬紅

1.一種引起大豆根腐病的鐮孢菌屬菌種的區(qū)分與鑒別方法，包括如下順序步驟：

(1)通過(guò)形態(tài)學(xué)特征鑒定為鐮孢菌屬，

(2)PCR擴(kuò)增鐮孢菌ITS序列，瓊脂糖凝膠電泳得到不同長(zhǎng)度的ITS序列；

(3)比對(duì)不同種類(lèi)鐮孢菌的ITS序列，找出特異性限制性?xún)?nèi)切酶位點(diǎn)，用不同酶組合酶解擴(kuò)增的ITS序列，形成不同的CAPS分子標(biāo)記，瓊脂糖凝膠電泳分離，得到各鐮孢菌不同的電泳分離模式，從而區(qū)分鐮孢菌屬不同菌種。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的區(qū)分與鑒別方法，所述步驟(2)中PCR擴(kuò)增采用下述引物ITS1F/ITS4：

ITS1F：5'-CTTGGTCATTTTAGAGGAAGTAA-3'，

ITS4：5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3'。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的區(qū)分與鑒別方法，所述菌種為茄病鐮孢菌(Fusariumsolani)，木賊鐮孢菌(Fusarium oxysporum)，尖孢鐮孢菌(Fusarium equiseti)及Fusarium Commune；所述步驟(2)中得到的茄病鐮孢菌的ITS序列比其它3類(lèi)鐮孢菌的ITS序列長(zhǎng)，用3％的瓊脂糖凝膠電泳可直接將茄病鐮孢菌和其它3類(lèi)鐮孢菌分開(kāi)。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的區(qū)分與鑒別方法，所述步驟(3)中，其它3類(lèi)鐮孢菌的擴(kuò)增產(chǎn)物用BspCNI+AvaI、BspCNI+PstI或BspCNI+AvaI+PstI進(jìn)行酶解，酶解產(chǎn)物用1.5％的瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳分離。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的區(qū)分與鑒別方法，所述步驟(1)形態(tài)學(xué)特征鑒定包括菌絲、分生孢子梗、分生孢子及厚垣孢子的形態(tài)、顏色、大小、比例及發(fā)生部位，鑒定出真菌的種類(lèi)，在顯微鏡下觀(guān)察到單菌落的PDA培養(yǎng)物分生孢子為鐮孢狀而判定為典型的鐮孢菌。