[發(fā)明專利]一種用于檢測(cè)細(xì)胞色素c的核酸適配體-分子印跡熒光傳感器及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810342112.3
• 申請(qǐng)日: 2018-04-16
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108801989B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-10-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李偉明;岑水斌;安文佳;付佳璐;潘素華;湯又文
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 番禺出入境檢驗(yàn)檢疫局綜合技術(shù)服務(wù)中心;廣東出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心;廣州市湯萊創(chuàng)新科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N21/64
• 分類號(hào): G01N21/64
• 代理公司: 廣州新諾專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44100
• 代理人: 林玉芳

1.一種用于檢測(cè)細(xì)胞色素c的核酸適配體-分子印跡熒光傳感器的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)制備預(yù)作用復(fù)合物

將模版分子細(xì)胞色素c、巰基修飾的細(xì)胞色素c核酸適配體溶解于磷酸緩沖液中，再加入甲基丙烯酸和交聯(lián)劑，在溫度為37℃的條件下，反應(yīng)12小時(shí)，制得預(yù)作用復(fù)合物；

2)制備核酸適配體—量子點(diǎn)復(fù)合物

向步驟1)獲得的預(yù)作用復(fù)合物通入氮?dú)?0分鐘，排除空氣，加入雙鍵修飾的錳摻雜硫化鋅量子點(diǎn)和引發(fā)劑，再加入磷酸緩沖液，在溫度為37℃、氮?dú)獗Ｗo(hù)的條件下，反應(yīng)12小時(shí)，制得核酸適配體—量子點(diǎn)復(fù)合物；

3)洗脫模版分子細(xì)胞色素c

將步驟2)獲得的核酸適配體—量子點(diǎn)復(fù)合物在轉(zhuǎn)速為12000rpm的條件下離心10分鐘，去掉上清液，用洗脫液除去核酸適配體—量子點(diǎn)復(fù)合物中的模版分子細(xì)胞色素c，得到核酸適配體-分子印跡熒光傳感器。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：巰基修飾的細(xì)胞色素c核酸適配體的序列為5’-HS-(CH₂)₆-CCGTGTCTGGGGCCGACCGGCGCATTGGGTACGTTGTTGC-(CH₂)₆-SH-3’。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述模版分子細(xì)胞色素c、巰基修飾的細(xì)胞色素c核酸適配體和甲基丙烯酸的摩爾比為1:1:(80-120)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述雙鍵修飾的錳摻雜硫化鋅量子點(diǎn)由以下步驟制備所得：

S1：取巰基丙酸修飾的錳摻雜硫化鋅量子點(diǎn)與體積分?jǐn)?shù)為50％的乙醇混合，攪拌15分鐘，再加入正硅酸乙酯和氨水，攪拌反應(yīng)2小時(shí)，繼續(xù)加入KH570，反應(yīng)4小時(shí)；

S2：步驟S1的反應(yīng)液在轉(zhuǎn)速為12000rpm的條件下離心10分鐘，去掉上清液，分別用乙醇和水洗滌數(shù)次，得到雙鍵修飾的錳摻雜硫化鋅量子點(diǎn)。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于：所述巰基丙酸修飾的錳摻雜硫化鋅量子點(diǎn)、水、乙醇、正硅酸乙酯、氨水和KH570的摩爾體積比為1mol:(310-315)L：(1.2-1.3)L：(2.5-2.6)L：(0.12-0.13)L。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述模版分子細(xì)胞色素c和雙鍵修飾的錳摻雜硫化鋅量子點(diǎn)摩爾比為1：(675-750)。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述交聯(lián)劑為N,N’-亞甲基雙丙烯酰胺；所述模版分子細(xì)胞色素c和N,N’-亞甲基雙丙烯酰胺的摩爾比為1:(4400-4600)。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述引發(fā)劑為四甲基乙二胺和過(guò)硫酸銨；所述模版分子細(xì)胞色素c和四甲基乙二胺的摩爾體積比為1mmol：(30-40)L；所述模版分子細(xì)胞色素c和過(guò)硫酸銨的摩爾比為1：(900-980)。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述磷酸緩沖液的摩爾濃度為10mmol/L，pH值為7-8；和/或，所述洗脫液為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5％的十二烷基磺酸鈉溶液。

10.一種用于檢測(cè)細(xì)胞色素c的核酸適配體-分子印跡熒光傳感器，其特征在于：所述核酸適配體-分子印跡熒光傳感器為根據(jù)權(quán)利要求1—9中任意一項(xiàng)所述的制備方法制備獲得的。