[發(fā)明專利]小麥粉過敏原高效提取劑及其使用方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810339651.1
• 申請日: 2018-04-16
• 公開（公告）號: CN108530513B
• 公開（公告）日: 2021-08-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李慧靜;姚亞亞;劉陽星月;王芳;李寧
• 申請（專利權(quán)）人: 河北農(nóng)業(yè)大學(xué);石家莊加麥佳生物制品有限公司
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14;G01N21/31;G01N33/53
• 代理公司: 北京中企鴻陽知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11487
• 代理人: 郭鴻雁

本發(fā)明小麥粉過敏原高效提取劑及其使用方法，涉及蛋白提取領(lǐng)域。其目的是為了提供一種提取率高、所提取小麥過敏原過敏免疫活性高的小麥過敏原高效提取劑及其使用方法。本發(fā)明小麥粉過敏原高效提取劑包括檸檬酸磷酸鹽緩沖液，所述檸檬酸磷酸鹽緩沖液中檸檬酸的濃度為3～5mmoL/L，磷酸鹽的濃度為70.3～147.3mmoL/L，所述檸檬酸磷酸鹽緩沖液的pH值為7.0～9.0。本發(fā)明的小麥粉過敏原高效提取劑的使用方法包括以下步驟：稱取；提取；檢測。本發(fā)明的小麥粉過敏原高效提取劑提取得到的過敏原含量分別較磷酸鹽緩沖液、三羥甲基氨基甲烷鹽酸、Coca′s液提高了59.4?106.3％、54.5?100％、70?120％；并且采用本發(fā)明的提取劑所得過敏原亞基種類豐富且過敏免疫活性高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及蛋白提取領(lǐng)域，特別是涉及一種用于小麥粉過敏原的提取劑及其使用方法。

背景技術(shù)

小麥粉中含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，蛋白含量占12.5％～13.4％。小麥過敏原是小麥粉蛋白的一部分。小麥過敏反應(yīng)的臨床表現(xiàn)與診斷：其侵犯人體的系統(tǒng)有消化系統(tǒng)、皮膚、呼吸系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)及全身性表現(xiàn)，癥狀主要包括乳糜瀉、腹腔疾病、過敏性休克、小麥運(yùn)動激發(fā)過敏癥、特異性皮炎、鼻炎、面包師哮喘癥、惡心、嘔吐、腹瀉等。

小麥粉過敏原是小麥粉中能導(dǎo)致小麥粉過敏患者過敏的蛋白，小麥過敏主要是指由小麥致敏蛋白引起的Ⅰ型超敏反應(yīng)。小麥過敏，根據(jù)其致敏蛋白、致敏途徑以及致敏機(jī)體的不同，引發(fā)不同的患病癥狀。小麥過敏反應(yīng)涉及免疫球蛋白(IgE)對小麥蛋白反應(yīng)，是免疫系統(tǒng)反應(yīng)。在小麥過敏的情況下，免疫系統(tǒng)把小麥蛋白當(dāng)作有害物質(zhì)進(jìn)行攻擊。有些人只對一種小麥蛋白過敏，而有的人則對兩種或多種小麥蛋白過敏。根據(jù)世界衛(wèi)生組織和國際免疫學(xué)會聯(lián)合會(WHO/IUIS)過敏原命名小組委員，截止到2016年11月29日已批準(zhǔn)13種食源性小麥過敏原，包括抑制蛋白、非特異性脂轉(zhuǎn)換蛋白、同工麥胚凝集素、ω5-醇溶蛋白、α淀粉酶CM17、硫氧還蛋白、高分子量麥谷蛋白、低分子質(zhì)量谷蛋白G1uB3-23、Y-醇溶蛋白、α-嘌呤硫素、線粒體NFKB1的泛素連接酶原激活劑、假定小麥蛋白、胚乳傳遞細(xì)胞特異性PR60前體、延伸因子1，其致敏亞基分子量分布為9.5、12、13、16、17、20、26、27、32～38、39.5、65、83、88kDa的蛋白。

目前小麥粉蛋白的提取方法主要有蛋白酶提取法、堿溶酸沉法、超聲波輔助酶法、超聲波輔助堿溶法、Osborne分級分離法、磷酸鹽緩沖液法(PBS)等，雖然方法較多，但是每種方法均有一些不足之處。其中蛋白酶提取法、堿溶酸沉法、超聲波輔助酶法、超聲波輔助堿溶法不用于小麥粉過敏原提取，因?yàn)樵撍姆N方法不僅提取純度低，而且還會在一定程度上降低小麥粉的致敏性，部分過敏原失去致敏性，Osborne分級分離法通過小麥中清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白四種主要蛋白成分的溶解度不同，進(jìn)行分步提取，分別為水溶性的清蛋白、鹽溶性的球蛋白、醇溶蛋白及稀酸或稀堿溶的麥谷蛋白，該方法提取過程復(fù)雜，提取過程中損失較多，所提蛋白為小麥粉過敏原致敏亞基種類少，免疫活性低，磷酸鹽緩沖液法是目前用于小麥過敏原提取的最常用的方法，所提蛋白亞基豐富度與本發(fā)明方法差異較小，但所提過敏原致敏亞基免疫活性低。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明是為了解決以上技術(shù)問題而提供的一種提取率高、所提取小麥過敏原過敏免疫活性高的小麥過敏原高效提取劑及其使用方法。

本發(fā)明涉及一種小麥粉過敏原高效提取劑，所述提取劑包括檸檬酸磷酸鹽緩沖液，所述檸檬酸磷酸鹽緩沖液中檸檬酸的濃度為3～5mmoL/L，磷酸鹽的濃度為70.3～147.3mmoL/L，所述檸檬酸磷酸鹽緩沖液的pH值為7.0～9.0。

優(yōu)選地，檸檬酸磷酸鹽緩沖液中檸檬酸的濃度為4mmoL/L，磷酸鹽的濃度為90.2～119.1mmoL/L，檸檬酸磷酸鹽緩沖液的pH值為8.0

優(yōu)選地，檸檬酸磷酸鹽緩沖液的濃度為30mmoL/L，檸檬酸磷酸鹽緩沖液的pH值為8.0。

本發(fā)明還涉及一種小麥粉過敏原高效提取劑的使用方法，所述使用方法包括以下步驟：