[發明專利]雙光子熒光鈉離子探針及其合成方法和應用

有效

• 申請號: 201810338342.2
• 申請日: 2018-04-16
• 公開（公告）號: CN108456192B
• 公開（公告）日: 2020-08-14
• 發明（設計）人: 黃池寶
• 申請（專利權）人: 遵義師范學院
• 主分類號: C07D323/00
• 分類號: C07D323/00;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 貴州派騰知識產權代理有限公司 52114
• 代理人: 谷慶紅

1.一種雙光子熒光鈉離子探針PNa，其特征在于：所述雙光子熒光鈉離子探針具有以下分子結構：

。

2.一種如權利要求1所述的雙光子熒光鈉離子探針PNa的合成方法，其特征在于：合成路線如下所示：

。

3.根據權利要求2所述的合成方法，其特征在于：雙光子熒光鈉離子探針PNa的合成步驟如下：

(1)稱取中間體6和氫化鈉，置于干燥單口燒瓶中，待用；

(2)稱取中間體5溶于四氫呋喃，置于恒壓加料器中，將恒壓加料器裝在單口燒瓶上，并抽真空用氬氣保護；

(3)將燒瓶置于冰水浴中，在攪拌和避光的條件下，將含有中間體5的四氫呋喃溶液逐滴滴加到混合液中，滴加時間40～50min；滴加完畢后，室溫攪拌反應24h；

(4)反應結束后，真空脫除THF，用二氯甲烷萃提3～4次，每次15～20mL，水洗2～3次，每次10～15mL，加無水氯化鈣干燥，過濾，真空脫除溶劑；得粗品經硅膠柱色譜洗脫分離，即得黃色粉末PNa。

4.根據權利要求3所述的合成方法，其特征在于：所述步驟(1)中中間體6與氫化鈉的摩爾比為1:1.2～1.5；所述步驟(2)中，中間體5和四氫呋喃的摩爾體積比為1:9～12。

5.根據權利要求3所述的合成方法，其特征在于：所述步驟(3)中，攪拌的頻率為300r/min。

6.根據權利要求3所述的合成方法，其特征在于：所述步驟(4)中，洗脫液組成為：V(正己烷):V(乙酸乙酯)＝12～15:1。

7.根據權利要求1所述的雙光子熒光鈉離子探針PNa或如權利要求2-6任一項所述的合成方法得到的探針PNa的應用，其特征在于：應用于探測細胞內鈉離子的存在、細胞內鈉離子區域分布和濃度信息，所述的應用為非診斷的應用。

8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于：所述的細胞為成纖維細胞。

9.根據權利要求7所述的應用，其特征在于：所述的雙光子熒光鈉離子探針，其應用方法是：將PNa溶于混合溶液MIS溶液中，采用HEPES(4-羥乙基哌嗪乙磺酸)緩沖溶液調節pH，在小鼠成纖維細胞培養基中加入1μmol·L^-1熒光探針分子PNa，并在30～40℃、含2～10％CO₂的細胞培養箱中孵育0.5～1h，取出細胞并用緩沖溶液PBS沖洗3-4次，并于無色血清游離介質中再孵化15～20min，然后用共聚焦激光掃描顯微鏡λ_ex＝800nm,～1.5W將射入的激光共聚焦于細胞上，收集600～650nm通道的熒光，由此獲得細胞內鈉離子濃度信息，實現對細胞內鈉離子的檢測和變化情況監測；所述MIS溶液是由以下體積比的成分組成：生理鹽水：乙醇：DMSO：聚氧乙烯60蓖麻油CrEL＝20：35：30：15。