[發明專利]一種用于檢測端粒長度預測冠心病風險的試劑盒

在審

• 申請號: 201810333019.6
• 申請日: 2018-04-13
• 公開（公告）號: CN108342474A
• 公開（公告）日: 2018-07-31
• 發明（設計）人: 周梁良
• 申請（專利權）人: 東華大學
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883
• 代理公司: 上海泰能知識產權代理事務所 31233
• 代理人: 黃志達;魏峯

本發明涉及一種用于檢測端粒長度預測冠心病風險的試劑盒，包括端粒區域檢測引物及探針序列，如SEQ ID NO.1?3所示；內參基因檢測引物及探針序列，如SEQ ID NO.4?6所示。本發明試劑盒的整個檢測過程采用全封閉形式，避免了交叉污染的可能，同時將端粒與內參于同一管內檢測，避免加樣不均一引起的誤差。本發明試劑盒的設計及結果判讀簡單方便，檢測結果可靠、特異性和靈敏性高。該發明可輔助檢測冠心病風險，進而提前預防。

技術領域

本發明屬于分子生物學和醫學檢測技術領域，特別涉及一種用于檢測端粒長度預測冠心病風險的試劑盒。

背景技術

冠心病是危害人類健康乃至生命的常見病之一，已成為致死率首要的疾病，目前我國心血管病患者約2.9億，每年約350萬人死于心血管病。雖然近幾年中國心血管病死亡率的上升趨勢有所趨緩，但仍給社會和家庭造成沉重的負擔。冠心病是由環境因素和遺傳因素相互作用導致的，與冠心病相關的危險因素高達200多種，其中包括主要因素：血脂異常、高血壓，吸煙，高血脂，2型糖尿病，年齡性別，肥胖，炎癥，飲食習慣，遺傳因素等，以及潛在因素：慢性炎癥，血凝因子水平升高，胰島素抵抗等。在眾多的危險因素中，遺傳因素在冠心病發病過程中起著重要的作用。

端粒是存在于真核細胞線狀染色體末端的一小段DNA-蛋白質復合體，它與端粒結合蛋白一起構成了特殊的“帽子”結構，作用是保持染色體的完整性和控制細胞分裂周期。端粒在染色體定位、復制、保護和控制細胞生長及壽命方面具有重要作用，并與細胞凋亡、細胞轉化和永生化密切相關。當細胞分裂一次，每條染色體的端粒就會逐次變短一些，構成端粒的一部分基因約50～200個核苷酸會因多次細胞分裂而不能達到完全復制(丟失)，以至細胞終止其功能不再分裂。因此，嚴重縮短的端粒是細胞老化的信號。在某些需要無限復制循環的細胞中，端粒的長度在每次細胞分裂后被能合成端粒的特殊性DNA聚合酶-端粒酶所保留。

心腦血管疾病的發生，其過程中伴隨氧化應激及持續炎癥反應，這些病例過程都可以促使端粒進一步縮短。研究發現，端粒長度與冠心病的發病顯著相關，因此，對端粒進行檢測，能了解個體在冠心病方面的發病相對風險，對與冠心病的早期診斷，早期干預具有積極意義。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種用于檢測端粒長度預測冠心病風險的試劑盒，涉及端粒檢測，檢測效率高，針對性強。

本發明的一種用于檢測端粒長度預測冠心病風險的試劑盒，包括：

端粒區域檢測引物及探針序列，如SEQ ID NO.1-3所示：

正向引物：5'-CGGTTTGTTTGGGTTTGGGTTTGGGTTTGGGTTTGGGTT-3'，

反向引物：5'-GGCTTGCCTTACCCTTACCCTTACCCTTACCCTTACCCT-3'，

探針：5'-FAM-AATCCCAATCCCAATCCCAATCCC-BHQ-3'；

內參基因檢測引物及探針序列，如SEQ ID NO.4-6所示：

正向引物：5'-GTAGAAGGTGTGGTGCCAG-3'，

反向引物：5'-CCTCACCCTGAAGTACCCCA-3'，

探針：5'-HEX-TCGTCCCAGTTGGTGACGAT-BHQ-3'。

所述內參基因為Actin。

所述試劑盒還包括陽性質控品和空白對照。

所述陽性質控品為端粒序列和內參基因序列混合物。

所述空白對照為去離子水。

所述試劑盒的檢測樣本為外周血、唾液或口腔黏膜細胞。