[發(fā)明專利]一種鹿茸脂質(zhì)體及制備和應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810332244.8
• 申請(qǐng)日: 2018-04-13
• 公開（公告）號(hào): CN110384715A
• 公開（公告）日: 2019-10-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 靳艷;葉明亮;晏嘉澤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所
• 主分類號(hào): A61K35/32
• 分類號(hào): A61K35/32;A61K9/127;A61P25/00;A61P25/28;A23L33/10;A23L33/115
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標(biāo)代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

本發(fā)明涉及一種鹿茸脂質(zhì)體的制備方法及應(yīng)用。本發(fā)明建立鹿茸脂質(zhì)體的制備方法，所制備的鹿茸脂質(zhì)體能夠改善記憶再現(xiàn)障礙小鼠的記憶再現(xiàn)能力，具有潛在的抗阿爾茨海默癥的活性，可應(yīng)用于阿爾茨海默癥等認(rèn)知障礙疾病的預(yù)防和治療，具有廣闊的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及鹿茸脂質(zhì)體，具體地說是一種鹿茸脂質(zhì)體的制備方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)

鹿茸為脊索動(dòng)物門哺乳綱鹿科的動(dòng)物梅花鹿或馬鹿的雄鹿未骨化密生絨毛的幼角。鹿茸入藥已有2000多年的歷史，《本草綱目》記載鹿茸“生精補(bǔ)髓，養(yǎng)血益陽，強(qiáng)筋健骨，治一切虛損、耳聾、目暗、眩暈虛痢”。近年來研究發(fā)現(xiàn)，鹿茸具有促進(jìn)神經(jīng)生長(zhǎng)、免疫調(diào)節(jié)、抗炎、抗氧化、抗衰老等多種生物學(xué)功能。鹿茸含有蛋白質(zhì)、糖胺聚糖、磷脂、脂肪酸、激素樣物質(zhì)、核酸、多胺及各種無機(jī)物質(zhì)，其中鹿茸蛋白是最主要的化學(xué)成分，占干重的53.9％～76.4％。

脂質(zhì)體是由磷脂及其類似物分散于水相，自發(fā)形成的具有雙分子層結(jié)構(gòu)的封閉囊泡。脂質(zhì)體能提高被包埋物的穩(wěn)定性，保護(hù)其活性的發(fā)揮，并可定向傳輸至某些器官或組織中，提高被包埋物的有效作用濃度。為提高鹿茸提取物的利用率，賦予其長(zhǎng)效、緩釋性能，將鹿茸提取-酶解后采用薄膜-超聲法包裹在脂質(zhì)體中，制備鹿茸脂質(zhì)體。

一次過量飲入乙醇會(huì)引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)由興奮轉(zhuǎn)為抑制，導(dǎo)致記憶力下降、注意力不能集中等癥狀。且乙醇可劑量依賴性的引起記憶認(rèn)知功能等損害，這些損害與GABA能突觸傳遞功能改變有關(guān)(Li Z,L RL,Cheng XZ.Journal of International Neurologyand Neurosurgery,2007,34(4):343-346)。因此，通過給予小鼠乙醇可建立記憶再現(xiàn)障礙模型，可考察鹿茸脂質(zhì)體對(duì)于阿爾茨海默癥的潛在治療作用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種鹿茸脂質(zhì)體的制備方法及應(yīng)用，本發(fā)明通過酶解將鹿茸中蛋白質(zhì)降解，經(jīng)純化后制備成鹿茸脂質(zhì)體，所制備的鹿茸脂質(zhì)體能夠改善記憶再現(xiàn)障礙模型小鼠的記憶再現(xiàn)功能。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

將鹿茸酶解、經(jīng)純化制備成鹿茸脂質(zhì)體。

(1)將新鮮鹿茸冷凍干燥后粉碎，加入鹿茸質(zhì)量10～50倍(最優(yōu)范圍為10～30倍)的去離子水，攪拌均勻后加入鹿茸質(zhì)量0.1～5％(W/W)(最優(yōu)范圍為0.2～1％)的蛋白酶A，在20～70℃(最優(yōu)范圍為35～60℃)溫度下酶解0.5～12小時(shí)(最優(yōu)范圍為2～4小時(shí))；酶解結(jié)束后傾倒提取液，殘?jiān)偌尤氲润w積去離子水和鹿茸質(zhì)量0.1～3％的蛋白酶B，在20～70℃(最優(yōu)范圍為35～60℃)溫度下酶解0.5～12小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后合并提取液，將溫度升至90～100℃并保溫10～30分鐘；

(2)酶解液降溫至室溫，以離心力2000～20000g離心10～20分鐘，收集上清液；將上清液經(jīng)200～500目的硅藻土抽濾，濾液冷凍干燥，得到鹿茸提取物；

(3)向圓底燒瓶中加入一定量的卵磷脂、膽固醇，加入25～100mL甲醇使卵磷脂、膽固醇的濃度分別為3.5～15.0mg/mL和0.6～3.0mg/mL，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，脂質(zhì)在燒瓶?jī)?nèi)壁形成干膜，氮?dú)獯蹈珊竺芊膺^夜；向燒瓶?jī)?nèi)加入一定量的鹿茸提取物，加入25～100mL水使鹿茸提取物濃度為1～4mg/mL，搖勻水化，冰浴超聲5～10min，得鹿茸脂質(zhì)體混懸液，冷凍干燥得到鹿茸脂質(zhì)體。另取0.5-2.0mL脂質(zhì)體混懸液經(jīng)1000～5000g離心10～20分鐘，取上清液經(jīng)Nanodrop Onec測(cè)定肽含量，計(jì)算包埋率(包埋率＝(1-上清液肽含量/鹿茸提取物質(zhì)量)×100％)。

所述蛋白酶A為胃蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶等蛋白酶中的一種或幾種組合；蛋白水解酶B為胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶、中性蛋白酶中的一種或幾種組合。蛋白酶A和蛋白酶B組成種類不能相同。