[發(fā)明專利]一種外周血單核細(xì)胞完全無血清凍存液及其方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810332214.7
• 申請日: 2018-04-13
• 公開（公告）號: CN108651439A
• 公開（公告）日: 2018-10-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳金;盧彬彬;陶飛龍;唐歡;何麗婷;程征雁
• 申請（專利權(quán)）人: 上海韻飛生物科技有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 蘇州衡創(chuàng)知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 32329
• 代理人: 王睿

1.一種外周血單核細(xì)胞完全無血清凍存液及其方法，其特征在于，包括以下組分：重組人白介素-2、人血白蛋白、聚乙二醇、海藻糖，以及基礎(chǔ)培養(yǎng)基或注射用氯化鈉。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種外周血單核細(xì)胞完全無血清凍存液及其方法，其特征在于：所述免疫細(xì)胞凍存液包括：重組人白介素-250-200U/mL；聚乙二醇0.1-0.4g/mL；海藻糖0.05-0.3g/ml；人血白蛋白0.01-0.1g/ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基或注射用氯化鈉90-99體積％，總量為100％。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種外周血單核細(xì)胞完全無血清凍存液及其方法，其特征在于：所述外周血單核細(xì)胞凍存液中的重組人白介素-2的含量為50-200U/mL，例如可以是50U/mL、60U/mL、80U/mL、100U/mL、120U/mL、150U/mL、1600U/mL、180U/mL、200U/mL，所述外周血單核細(xì)胞凍存液中的聚乙二醇含量為0.1-0.4g/mL，例如可以是0.1g/mL、0.12g/mL、0.15g/mL、0.2g/mL、0.22g/mL、0.25g/mL、0.3g/mL、0.32g/mL、0.35g/mL、0.38g/mL、0.4g/mL，所述外周血單核細(xì)胞凍存液中的海藻糖含量為0.05-0.3g/mL，例如可以是0.05g/mL、0.1g/mL、0.15g/mL、0.2g/mL、0.25g/mL、0.3g/mL，所述外周血單核細(xì)胞凍存液中的基礎(chǔ)培養(yǎng)基或注射用氯化鈉的體積百分含量為90％、90.5％、91％、91.5％、92％、92.5％、93％、93.5％、94％、94.5％、95％、95.5％、96％、96.5％、97％、97.5％、98％、98.5％、99％，所述外周血單核細(xì)胞凍存液中的人血白蛋白含量為0.01-0.1g/mL，例如可以是0.01g/mL、0.02g/mL、0.03g/mL、0.04g/mL、0.05g/mL、0.06g/mL、0.07g/mL、0.08g/mL、0.09g/mL、0.1g/mL，當(dāng)在外周血單核細(xì)胞凍存液中還含有除重組人白介素-2、聚乙二醇、海藻糖、人血白蛋白組分以外的其它組分時，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基或注射用氯化鈉的含量會進(jìn)行適當(dāng)?shù)南抡{(diào)，比如降低為80％-95％，例如所述基礎(chǔ)培養(yǎng)的含量還可以是80％、80.5％、81％、81.5％、82％、82.5％、83％、83.5％、84％、84.5％、85％、85.5％、86％、86.5％、87％、87.5％、88％、88.5％、89％、89.5％，以滿足所述免疫細(xì)胞凍存液中各組分含量之和為100％，所述外周血單核細(xì)胞凍存液中的重組人白介素-2、聚乙二醇、海藻糖、人血白蛋白，以及基礎(chǔ)培養(yǎng)基或注射用氯化鈉可以采用上述各組分所選擇的含量進(jìn)行任意配合，各組分的體積百分含量之和為100％。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種外周血單核細(xì)胞完全無血清凍存液及其方法，其特征在于：所述外周血單核細(xì)胞凍存液包括：重組人白介素-2100-200U/mL；聚乙二醇0.2-0.4g/mL；海藻糖0.1-0.2g/mL；基礎(chǔ)培養(yǎng)基或注射用氯化鈉95-99體積％。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種外周血單核細(xì)胞完全無血清凍存液及其方法，其特征在于：所述外周血單核細(xì)胞凍存液中，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基為DMEM/F12培養(yǎng)基(Gibco)或淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基[X-VIVOTM15(LONZA)、HIPP-T009(倍諳基)]，且所述淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基為HIPP-T009(倍諳基)，其均可購自倍諳基公司。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種外周血單核細(xì)胞完全無血清凍存液及其方法，其特征在于：所述免疫細(xì)胞為T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞或CIK細(xì)胞中的任意一種。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種外周血單核細(xì)胞完全無血清凍存液及其方法，其特征在于：本發(fā)明提供了一種外周血單核細(xì)胞的凍存方法，包括一下步驟：

(1)將外周血單核細(xì)胞與本發(fā)明所述的外周血單核細(xì)胞凍存液混合；

(2)進(jìn)行程序降溫至-80℃，然后轉(zhuǎn)移至液氮中冷凍保存。