[發明專利]豬瘟病毒單克隆抗體HK24及醫用用途

有效

• 申請號: 201810331569.4
• 申請日: 2018-04-13
• 公開（公告）號: CN108530533B
• 公開（公告）日: 2020-09-04
• 發明（設計）人: 歐陽紅生;董海司;逄大欣;蘇昂;董建偉
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;A61K39/42;A61P31/14;G01N33/569;G01N33/577
• 代理公司: 吉林長春新紀元專利代理有限責任公司 22100
• 代理人: 陳宏偉

本發明提供了一種豬瘟病毒單克隆抗體HK24及醫用用途，可用于制備診斷或檢測豬瘟病毒試劑；也可用于制備預防治療豬瘟生物制劑；對于減少豬瘟病毒給養豬業造成的經濟損失具有重要意義。

技術領域

本發明提供了特異性結合、并能有效中和豬瘟病毒的抗體HK24及其序列，屬于生物技術和分子免疫學領域。

技術背景

抗體（antibody，Ab）是介導體液免疫的重要效應分子，在病毒感染過程中主要通過與相應抗原特異性結合阻止病原微生物黏附靶細胞受體，對機體起保護作用。抗體的發現不僅在人類疾病診斷、治療和有害物質的分析檢測等領域做出了巨大貢獻，而且是生物醫藥的重要組成部分，繼重組蛋白后引領了第二次生物醫藥產品浪潮。

近年來，smart-seq2技術的出現，實現了單細胞全長cDNA的獲得，為抗體基因的獲取提供了可能。避免了冗雜的雜交瘤細胞篩選過程，且所產生的抗體不再限制于抗鼠的抗體，為研發抗體藥物及疾病的免疫治療提供了基礎。

豬瘟（Classical swine fever, CSF）是由豬瘟病毒（Classical swine fevervirus, CSFV）感染引起豬的一種烈性傳染病，具有急性、熱性、高度接觸性等特點，被世界動物衛生組織（OIE）列為A類傳染病，嚴重威脅養豬業發展。CSFV是一種含有囊膜的單股正鏈RNA病毒，屬于黃病毒科瘟病毒屬成員，基因組長約12.3kb，編碼4個結構蛋白C（p14）、E0（gp48）、E1（gp33）、E2（gp53）及7個非結構蛋白p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B。其中，糖蛋白 E2是最主要的免疫原性蛋白，可誘導機體產生中和性抗體，保護機體免受病毒的攻擊。因此本發明利用合成的E2蛋白中保守表位5-tamra-CTAVSPTTLRTEVVK與FITC-anti-pigIgG同時標記細胞，高效篩選表位特異性抗體分泌細胞，利用smart-seq2技術獲得豬瘟病毒特異性抗體基因的序列，成功表達獲取了具有中和活性的豬瘟病毒特異性單克隆抗體，為豬瘟病毒血清學的快速診斷，開發豬瘟新型疫苗及豬瘟的防治提供了候選者。

發明內容

本發明公開了一種豬瘟病毒單克隆抗體HK24，該抗體能夠結合豬瘟病毒E2蛋白，并且有效中和豬瘟病毒。

本發明所述的一種豬瘟病毒單克隆抗體HK24，包括輕鏈和重鏈，其特征在于：

所述單克隆抗體的重鏈全長氨基酸序列為SEQ ID 1，可變區氨基酸序列為序列表中的SEQ ID 3；

所述單克隆抗體的輕鏈全長氨基酸序列為SEQ ID 5，可變區氨基酸序列為序列表中的SEQ ID 7；

所述的豬瘟病毒單克隆抗體HK24，其特征在于：

能夠編碼抗體重鏈全長核酸序列為SEQ ID 2；所述抗體的重鏈可變區包含核苷酸序列為SEQ ID 4；

能夠編碼抗體輕鏈全長核酸序列為SEQ ID 6；所述抗體的輕鏈可變區包含核苷酸序列為SEQ ID 8。

所述單克隆抗體或其抗原結合片段選自Fab、Fab’、F (ab’)₂、Fd、Fv、Fc、dAb、互補決定區片段、單鏈抗體。

所述的單克隆抗體包括非CDR區，且所述非CDR區來自不是豬類的物種。

所述的豬瘟病毒單克隆抗體HK24在診斷或檢測豬瘟病毒試劑中的用途。

所述的豬瘟病毒單克隆抗體HK24在預防治療豬瘟生物制劑中的用途。

本發明豬瘟病毒單克隆抗體HK24的制備方法，包括以下步驟：在豬21-30日齡和65日齡時分別注射1次豬瘟疫苗（兔化弱毒株，吉林正業生物制品股份有限公司），間隔一周后加強免疫一次，共免疫三次；