[發明專利]一種檢測人調節性T細胞亞型的試劑盒及檢測方法

有效

• 申請號: 201810331146.2
• 申請日: 2018-04-13
• 公開（公告）號: CN108508196B
• 公開（公告）日: 2020-10-27
• 發明（設計）人: 何韶衡;何萍
• 申請（專利權）人: 何韶衡
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533;G01N33/50
• 代理公司: 北京華進京聯知識產權代理有限公司 11606
• 代理人: 彭輝

本發明提供了一種檢測人調節性T細胞亞型的試劑盒及其檢測方法，屬于細胞亞型檢測技術領域。本發明提供的試劑盒，包括以下組分：血液稀釋液，單個核細胞分離液，細胞培養液，淋巴細胞活化液，死細胞去除染料，FcR阻斷劑、熒光標記的抗人細胞表面標記分子的抗體、熒光標記的抗人細胞內分子的抗體、PBS緩沖液、脂多糖、洗滌緩沖液、細胞染色緩沖液、細胞固定液和透膜洗液。檢測時，首先分離全血中的單個核細胞，其次刺激人外周血單個核細胞，最后熒光抗體染色即可檢測調節性T細胞亞型。利用本發明的試劑盒及檢測方法可簡單快捷的分辨2?6種調節性T細胞亞型。

技術領域

本發明屬于細胞亞型檢測技術領域，具體涉及一種檢測人調節性T細胞亞型的試劑盒及檢測方法。

背景技術

19世紀90年代中期，人們提出CD4⁺抑制性T細胞，即調節性T(Treg) 細胞，可以抑制效應性T細胞如Th細胞對機體的免疫損傷效應。目前，越來越多的資料顯示人體內有幾種不同亞型的Treg，且其在免疫系統中的作用不同，使得Treg的作用更加復雜。

幼稚T細胞在不同條件可分化為多種調節性T(Treg)細胞，目前已鑒定出至少7種Treg細胞亞型：(1)nTregs：分泌IL-10和TGF-β的 CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺的T細胞，是數量最多的Treg細胞亞型；(2)iTregs：外來抗原可刺激外周血幼稚CD4⁺T細胞誘導其表達Foxp3，此外分泌TGF-β和IL-10的Th3細胞也屬于該亞型；(3)CD127^low/-Treg：在新生兒胸腺發現了CD4⁺CD25⁺CD127^low/-Foxp3⁺Treg細胞；(4)ICOS⁺Treg：ICOS⁺Treg細胞表達IL-10、IL-17和干擾素(IFN)-γ；(5)Tr1細胞：Tr1細胞是不表達 Foxp3但分泌IL-10并可抑制效應性Th細胞功能CD4⁺T細胞；(6)CD8⁺Tregs： OT-1CD8細胞在IL-4和IL-12作用下可迅速分化為表達CD8、分泌IL-10 的Treg細胞(CD8⁺Treg細胞)，且共表達活化和幼稚細胞相關的標記物；(7) 產IL-17的Foxp3⁺Tregs。

鑒于Treg細胞有多種亞型，且其在機體中的作用不同，將其分辨開進行單獨研究顯得尤為重要。但是目前市售的Treg試劑盒僅將CD4⁺CD25⁺ Foxp3⁺T細胞定義為Treg細胞，并不包括CD8⁺Treg細胞和CD127^low/-Treg 細胞，也不能進一步鑒定CD4⁺Treg細胞中的其它Treg細胞亞型。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種可同時分辨2-6種人調節性T細胞亞型的試劑盒。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種檢測人調節性T細胞亞型的試劑盒，包括以下組分：血液稀釋液、單個核細胞分離液、細胞培養液、淋巴細胞活化液、死細胞去除染料、FcR阻斷劑、熒光標記的抗人細胞表面標記分子的抗體、熒光標記的抗人細胞內分子的抗體、脂多糖、洗滌緩沖液、細胞染色緩沖液、細胞固定液和透膜洗液；所述熒光標記的抗人細胞表面標記分子的抗體包括：抗人 CD3或CD4抗體，抗人CD8抗體，抗人CD25抗體，抗人CD127抗體，抗人ICOS抗體，抗人TGF-β抗體和抗人CCR6抗體；所述熒光標記的抗人細胞內分子的抗體包括：抗人IL-10抗體，抗人IL-17抗體和抗人Foxp3抗體。