[發(fā)明專利]一種大鼠血漿中人參皂苷的測(cè)定方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201810330352.1 | 申請(qǐng)日： | 2018-04-13 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN108226350B | 公開（公告）日： | 2020-09-15 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 馬梅伍 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 康龍化成（北京）生物技術(shù)有限公司 |
| 主分類號(hào)： | G01N30/02 | 分類號(hào)： | G01N30/02 |
| 代理公司： | 北京維正專利代理有限公司 11508 | 代理人： | 趙萬凱 |
| 地址： | 102200 北京*** | 國(guó)省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 大鼠 血漿 人參 皂苷 測(cè)定 方法 | ||
本發(fā)明涉及血漿中藥物代謝的檢測(cè)，具體是一種檢測(cè)大鼠血漿中五種人參皂苷的方法，其特征在于：采用甲醇沉淀蛋白后，二氯甲烷提取，固相萃取柱凈化，通過氣相色譜法實(shí)現(xiàn)血漿中Ra1、Rb1、Rh1、Re和Ro的檢測(cè)。本方法相比現(xiàn)有技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)在于：準(zhǔn)確度高，靈敏度高，重復(fù)性好，適用于血漿中上述五種人參皂苷的同時(shí)定量檢測(cè)，可用于血漿中人參皂苷代謝途徑的研究。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及大鼠血漿中人參皂苷的檢測(cè)方法，包括Ra1、Rb1、Rh1、Re和Ro五種人參皂苷的同時(shí)定量檢測(cè)。
背景技術(shù)
人參對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)心血管內(nèi)分泌免疫系統(tǒng)有著廣泛的藥理活性人參皂昔及其在腸道的水解產(chǎn)物被認(rèn)為是亞洲人參、西洋參、三七中主要的藥理活性成分，然而它們的作用機(jī)理仍不十分清楚，服用人參制劑后機(jī)體對(duì)皂昔類成分暴露水平的評(píng)估有助于揭開其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。
近年來，中藥藥代動(dòng)力學(xué)研究在闡釋中藥復(fù)方藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制方面的應(yīng)用越來越廣泛中藥藥代動(dòng)力學(xué)是利用動(dòng)力學(xué)原理與處理方法，定量地描述中藥有效成分有效部位單味中藥和復(fù)方中藥通過各種途徑進(jìn)入機(jī)體后吸收分布代謝和排泄等過程的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律，在闡明中藥作用機(jī)制及其科學(xué)內(nèi)涵設(shè)計(jì)及優(yōu)選給藥方案促進(jìn)新藥研發(fā)和劑型改進(jìn)等方面起著重大作用。
Ra1、Rb1、Rh1、Re和Ro五種人參皂苷是人參的代表性成分，代表人參的部分藥效。現(xiàn)有技術(shù)中，研究血漿中人參皂苷的藥代動(dòng)力學(xué)的方法主要是液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，該法儀器成本較高，未有單純采用氣相色譜法對(duì)上述五種人參皂苷的研究報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的旨在提供一種具備準(zhǔn)確且能夠同時(shí)檢測(cè)大鼠血漿中五種人參皂苷(Ra1、Rb1、Rh1、Re和Ro)的方法。
本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的：
一種檢測(cè)大鼠血漿中人參皂苷的方法，具體步驟如下：
(1)取大鼠血漿，置于離心管中，加入甲醇沉淀蛋白，渦旋，離心，取上清液置于另一干凈的離心管中，加入二氯甲烷，渦旋，離心；
(2)取Oasis HLB柱，活化，加入上述上清液，甲醇洗脫，收集洗脫液，濃縮，復(fù)溶，進(jìn)樣；
(3)檢測(cè)條件：色譜柱：DB-35MS；升溫程序：初始溫度60℃，以50℃/min的速率升至160℃，再以20℃的速度升至220℃；FID檢測(cè)器檢測(cè)。
進(jìn)一步的，所述沉淀蛋白步驟如下：取大鼠血漿100μL，置于2mL離心管中，加入200μL甲醇，渦旋1min，離心。
進(jìn)一步的，上述萃取步驟如下：取沉淀蛋白后的上清液，置于另一干凈的2mL離心管，加入500μL二氯甲烷，渦旋1min，離心。
進(jìn)一步的，上述兩次離心的條件為1000g，3min。
進(jìn)一步的，活化步驟如下：采用甲醇、水、二氯甲烷依次活化Oasis HLB柱，加入提取后的上清液，采用3mL甲醇洗脫，收集洗脫液。
進(jìn)一步的，所述濃縮復(fù)溶步驟如下：取洗脫液，氮?dú)獯抵两桑瑲埩粑锊捎眉状紡?fù)溶。
進(jìn)一步的，色譜條件如下：DB-35MS，30m×0.25mm，0.25μm；升溫程序：初始溫度60℃，以50℃/min的速率升至160℃，再以20℃的速度升至220℃；進(jìn)樣口溫度250℃；載氣：氮?dú)猓兌取?9.999％；流速1.2mL/min；進(jìn)樣量1μL；無分流進(jìn)樣。
進(jìn)一步的，檢測(cè)條件如下：FID檢測(cè)器，檢測(cè)溫度250℃，氫氣和空氣的流速分別為40、400mL/min。
進(jìn)一步的，人參皂苷包括Ra1、Rb1、Rh1、Re和Ro。
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