[發明專利]擴增造血干細胞的培養體系、方法及其用途

有效

• 申請號: 201810330298.0
• 申請日: 2018-04-13
• 公開（公告）號: CN109706119B
• 公開（公告）日: 2020-11-27
• 發明（設計）人: 孫忠杰;郭瀟;陳立功;薛慶磊;王曉芳
• 申請（專利權）人: 諾未科技（北京）有限公司;諾未科技（銀川）有限公司
• 主分類號: C12N5/0789
• 分類號: C12N5/0789
• 代理公司: 北京紐樂康知識產權代理事務所(普通合伙) 11210
• 代理人: 白明珠

1.擴增造血干細胞的培養體系，包括細胞培養基，其特征在于，所述細胞培養基為含有丁酸鈉、TPO、SCF和FLT3L的StemSpan SFEM II培養基，所述細胞培養基中丁酸鈉的濃度為50~200μmol/L，所述TPO在細胞培養基中的濃度為30-70ng/mL；所述SCF在細胞培養基中的濃度為80-120ng/mL；所述FLT3L在細胞培養基中的濃度為90-110ng/mL。

2.根據權利要求1所述的擴增造血干細胞的培養體系，其特征在于，所述細胞培養基中，丁酸鈉的濃度為100μmol/L。

3.造血干細胞的體外擴增方法，其特征在于，獲取新鮮血樣造血干細胞為樣本細胞，采用權利要求1或2所述的擴增造血干細胞的培養體系進行體外擴增培養，得到造血干細胞。

4.根據權利要求3所述的造血干細胞的體外擴增方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1：將丁酸鈉溶解于無菌ddH₂O中，得到丁酸鈉濃儲溶液；

S2：將SCF 、 FLT3L 、TPO、步驟S1中得到的丁酸鈉濃儲溶液添加到StemSpan SFEM II基本培養基中，得到細胞培養基；

S3：獲取新鮮血樣造血干細胞接種至步驟S2得到的細胞培養基中進行擴增培養，得到更大數量的造血干細胞。

5.根據權利要求4所述的造血干細胞的體外擴增方法，其特征在于，所述步驟S3進一步包括以下步驟：

S31：利用淋巴細胞分離液將新鮮血樣分離得到單個核細胞，通過MACS分選得到CD34+細胞，即造血干細胞，隨后將造血干細胞儲存于液氮中；

S32：擴增培養前，先將造血干細胞解凍，加生理鹽水重懸洗滌再離心，收集得到造血干細胞。

6.權利要求1或2所述的擴增造血干細胞的培養體系在以新鮮血樣造血干細胞為樣本細胞制備造血干細胞中的用途。