[發明專利]一種黃柏對照提取物及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201810330280.0
• 申請日: 2018-04-13
• 公開（公告）號: CN110376317A
• 公開（公告）日: 2019-10-25
• 發明（設計）人: 郭隆鋼;陸順瑤;許舜軍;許藝鐫
• 申請（專利權）人: 廣州萬正藥業有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/90;G01N30/02
• 代理公司: 北京君尚知識產權代理有限公司 11200
• 代理人: 余長江

1.一種黃柏對照提取物，其特征在于，所述提取物為黃色干燥粉末，其是由含重量百分比黃柏提取物67-84％和輔料16-33％組成，其中黃柏提取物中小檗堿含量不低于30％。

2.如權利要求1所述的黃柏對照提取物，其特征在于，其中黃柏提取物中小檗堿含量不低于34％。

3.如權利要求1所述的黃柏對照提取物，其特征在于，所述輔料為微粉硅膠、藥用淀粉中一種或兩種。

4.如權利要求1所述的一種黃柏對照提取物，其特征在于，是通過下述方法制備得到的：

(1)黃柏干膏：取不同來源及批次的黃柏藥材粉末用甲醇超聲提取，濾過得濾液，濾液蒸干得到黃柏干膏；

(2)黃柏提取物：黃柏干膏溶解于甲醇，再加入輔料蒸干研磨過篩即得黃柏提取物；

(3)黃柏對照提取物：將不同來源或批次的黃柏提取物進行調配勾兌，得到黃柏對照提取物。

5.如權利要求4所述的一種黃柏對照提取物，其特征在于，步驟(1)前增加不同黃柏藥材來源的篩選步驟：將不同來源或批次的原料藥材以薄層色譜法和/或高效液相色譜法進行檢測；然后對不同來源或批次的原料藥材的通過薄層色譜法和/或高效液相色譜法得到的色譜圖和/或測定的小檗堿含量進行比較分析，剔除色譜圖和/或測定的含量異常的原料藥材，保留色譜圖和/或測定的含量一致的原料藥材進行下一步的黃柏干膏的制備。

6.如權利要求4所述的一種黃柏對照提取物，其特征在于，步驟2與步驟3之間還包括以薄層色譜法和/或高效液相色譜法對不同批次的黃柏提取物的小檗堿進行檢測的步驟。

7.如權利要求4所述的一種黃柏對照提取物，其特征在于，步驟1中黃柏藥材粉末與甲醇的重量體積比為1:8～1:50；所述超聲時間為30～60min，功率為100W～3kW；步驟2中甲醇用量為2-5倍干膏重量；步驟3中所述的調配具體指：將不同來源或批次的黃柏提取物進行調配，應使最終的黃柏對照提取物中對應原藥材比例為1：(2-5)g/g，其中含量以wt％計小檗堿的含量≥34％。

8.如權利要求6所述的一種黃柏對照提取物，其特征在于，所述黃柏提取物的薄層色譜法和/或高效液相色譜法檢測方法，包括如下步驟：

其中薄層色譜法包括如下步驟：

(1)化學對照品溶液：精密稱取小檗堿，用甲醇配制成0.1mg/ml的溶液；

(2)黃柏提取物溶液：精密黃柏提取物用甲醇超聲處理，定容，配成濃度為2.5mg/ml溶液，過0.22μm濾膜即得；

(3)所述薄層色譜法檢測條件為：

薄層板：G60預制板；

點樣：0.5μl，條帶狀點樣長6mm；

展開劑：乙酸丁酯：甲醇：異丙醇：氨水＝5：2：1.5：1.2；

展開方式：雙槽展開缸，一側加展開劑，另一側放置濃氨水試液共同預平衡15分鐘，展開劑使用量：濃氨水使用量＝1：1-2；

板的干燥：點樣后的薄層板置于五氧化二磷真空干燥器，保證薄層板的干燥；

檢視:置于UV366nm下檢視；

其中高效液相色譜法包括如下步驟：

(1)化學對照品溶液的制備：精密稱取小檗堿，用甲醇配制成0.1mg/ml的溶液；

(2)黃柏提取物供試品溶液的制備：取黃柏提取物加入甲醇-鹽酸(100：1)，超聲處理，放冷，配制成濃度為0.24mg/ml的溶液，濾過，取續濾液，即得黃柏提取物溶液；

(3)色譜條件：

所述的高效液相色譜法檢測條件：

色譜儀器：高效液相色譜儀，配有DAD檢測器

色譜柱：C₁₈柱(250mm×4.6mm，5μm)；

流動相：A-乙腈，B-含0.3％磷酸-0.3％三乙胺1：1；

梯度洗脫程序：

檢測波長270nm，DAD檢測器；流速0.8ml/min；進樣量10μl；柱溫25℃；

(4)檢測方法：精密吸取供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖及計算小檗堿含量。