[發明專利]用于生物標志物靈敏檢測的基于競爭性非共價相互作用的質譜檢測方法

有效

• 申請號: 201810329532.8
• 申請日: 2018-04-13
• 公開（公告）號: CN110376382B
• 公開（公告）日: 2020-06-16
• 發明（設計）人: 聶宗秀;韓靜;占鈴鵬;薛晉娟;孫潔
• 申請（專利權）人: 中國科學院化學研究所;中國科學院大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;吳愛琴

本發明公開了一種用于生物標志物靈敏檢測的基于競爭性非共價相互作用的質譜檢測方法。本發明利用了質譜檢測靈敏度高，檢測限低，高通量和能提供準確的分子質量或分子結構信息的優勢，克服了傳統生物標志物檢測靈敏度低，抗干擾性差的缺點。本發明由于其良好的靈敏度，對檢測物微量變化的響應度高，以及對復雜基質的抗干擾性高的優點，可以用于實際病人樣本的檢測，為臨床癌癥的診斷治療提供可靠的分析手段。

技術領域

本發明屬于質譜檢測技術領域，具體涉及一種用于生物標志物靈敏檢測的基于競爭性非共價相互作用的質譜檢測新方法。

背景技術

生物標志物是指可以標記系統、器官、組織、細胞及亞細胞結構或功能的改變或可能發生的改變的生化指標，具有非常廣泛的用途。生物標志物可用于疾病診斷、判斷疾病分期或者用來評價新藥或新療法在目標人群中的安全性及有效性。但是由于其結構的復雜多樣性，很難被有效靈敏地檢測到。

基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜(MALDI-TOF MS)，由于其靈敏度高，檢測限低，高通量和能提供準確的分子質量或分子結構信息，從而廣泛地應用于分析檢測中。MALDI-TOF MS不但可以分析無機分子，聚合物，還可以分析大分子，如核酸和蛋白質。當有些分析物無法直接通過MALDI-TOF MS檢測時，通常會引入一種容易解吸電離的質量標簽來間接檢測。基于以上優勢，質譜作為一種有效的分析方法在生物標志物的檢測上具有潛在價值。

因此，發展一種基于MALDI-TOF MS的檢測新方法，提高生物標志物的檢測靈敏度十分重要。

發明內容

本發明的目的是提供一種用于生物標志物靈敏檢測的基于競爭性非共價相互作用的質譜檢測方法。

本發明所提供的用于生物標志物靈敏檢測的基于競爭性非共價相互作用的質譜檢測方法，包括下述步驟：

1)根據待檢測的生物標志物設計核酸適配體；

2)將核酸適配體與金納米顆粒一起孵育，得到核酸適配體-金納米顆粒結合體；

3)將所述核酸適配體-金納米顆粒結合體分別與一系列已經濃度的生物標志物標準品、固定量的質量標簽共同孵育，分離，對得到的固體分別進行基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜分析，得到一系列對應于已知濃度的生物標志物的與金納米顆粒結合的質量標簽的信號，建立標準的生物標志物的濃度與質量標簽的信號的對應關系；

4)將未知濃度的生物標志物與步驟2)中的所述核酸適配體-金納米顆粒結合體和質量標簽共同孵育，分離，對得到的固體進行基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜分析，得到對應于未知濃度的生物標志物的金納米顆粒結合的質量標簽的信號，根據步驟3)中的標準的生物標志物的濃度與質量標簽的信號的對應關系，得到生物標志物的濃度。

上述方法中，所述生物標志物具體可為前列腺癌特異性抗原。

前列腺癌特異性抗原是一種含有237個氨基酸的單鏈多肽，屬于具有組織特異性的有糜蛋白酶樣作用的絲氨酸蛋白酶族，可以分解精液中的主要膠狀蛋白，有稀釋精液的作用。前列腺癌特異性抗原具有組織特異性，只存在于人前列腺腺泡及導管上皮細胞胞漿中，不表達于其它細胞，是目前臨床上常用的前列腺癌診斷的標志物。

當所述待檢測的生物標志物為前列腺癌特異性抗原時，所述核酸適配體的序列為CGT CGT ATT AAA GCT CGC CAT CAA ATA GCT TT。

上述方法中，所述金納米顆粒的粒徑分布在11-17nm之間，平均尺寸為13nm；紫外特征吸收最大值在520nm波長處。

所述核酸適配體與金納米顆粒的孵育溫度可為室溫，時間可為12-24h。

在酸性pH條件下進行可以增強核酸適配體與金納米顆粒的相互作用。