[發(fā)明專利]一種間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清凍存液組合物

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810325345.2
• 申請(qǐng)日: 2018-04-08
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110338187A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-10-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 仝彩玲
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 生物角（廈門(mén)）科技有限公司
• 主分類號(hào): A01N1/02
• 分類號(hào): A01N1/02
• 代理公司: 廈門(mén)市首創(chuàng)君合專利事務(wù)所有限公司 35204
• 代理人: 張松亭;姜謐

本發(fā)明公開(kāi)了一種間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清凍存液組合物，其配方由間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基、DMSO10、甘油5和海藻糖5以100mL∶2～15g∶2～10g∶2～5g的比例組成。本發(fā)明的主要用于間充質(zhì)干細(xì)胞的凍存，不含血清及血清替代物，無(wú)需梯度降溫凍存，給間充質(zhì)干細(xì)胞凍存帶來(lái)了極大的便利，無(wú)需經(jīng)過(guò)程序降溫凍存，細(xì)胞經(jīng)復(fù)蘇，細(xì)胞有較高的復(fù)蘇效率。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清凍存液組合物。

背景技術(shù)

間充質(zhì)干細(xì)胞是細(xì)胞治療中最常用的細(xì)胞，可用于組織的修復(fù)和臨床治療。在常規(guī)的細(xì)胞保存過(guò)程中都會(huì)加入血清成本，血清的加入可給細(xì)胞帶來(lái)充足的營(yíng)養(yǎng)，同時(shí)增加細(xì)胞的復(fù)蘇成活率。血清凍存細(xì)胞的方法是實(shí)驗(yàn)室最常用的方法。但血清中含有一些異種蛋白用于臨床的細(xì)胞含有異種蛋白可能引起病人的過(guò)敏反應(yīng)，血清中還可能存在一些人蓄共患病病毒，可引起人蓄共患病的傳播，另外，血清中含有一些外泌體，其也可以傳播疾病，也不適用于外泌體研究的試驗(yàn)。干細(xì)胞在血清中凍存時(shí)間太久，復(fù)蘇后也會(huì)對(duì)其分化產(chǎn)生影響。常規(guī)的凍存過(guò)程采用梯度降溫凍存，其過(guò)程繁瑣，耗時(shí)長(zhǎng)，給細(xì)胞凍存帶來(lái)了諸多不利。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)缺陷，提供一種間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清凍存液組合物。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

一種間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清凍存液組合物，其配方由間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基、DMSO10、甘油5和海藻糖5以100mL∶2～15g∶2～10g∶2～5g的比例組成；

上述間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基的pH為7.2～7.4，以DMEM培養(yǎng)基為溶劑，并含有如下濃度的組分：地塞米松1～100nM/L、氫化可的松0.1～10ug/mL、乙醇胺0.2～2ug/mL、FGF 5～50ng/mL、EGF 5～50ng/mL、亞硒酸鈉0.01～0.1ug/mL、胰島素0.5～1ug/mL、β-巰基乙醇10～50nM、轉(zhuǎn)鐵蛋白0.5～5ug/mL、維生素C 0.5～10ug/mL、1×的L-Glu、1×的NEAA和1×的抗生素；

上述間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清凍存液組合物的配制方法為：將DMSO、甘油和海藻糖溶解于間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基中，過(guò)濾除菌后即成。

在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基以DMEM培養(yǎng)基為溶劑，并含有如下濃度的組分：地塞米松5～20nM/L、氫化可的松8～10ug/mL、乙醇胺0.2～1ug/mL、FGF 10～20ng/mL、EGF 10～20ng/mL、亞硒酸鈉0.03～0.07ug/mL、胰島素0.5～0.8ug/mL、β-巰基乙醇40～50nM、轉(zhuǎn)鐵蛋白2～3ug/mL、維生素C 2～3ug/mL、1×的L-Glu、1×的NEAA和1×的抗生素。

進(jìn)一步優(yōu)選的，所述間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基以DMEM培養(yǎng)基為溶劑，并含有如下濃度的組分：地塞米松10nM/L、氫化可的松、10ug/mL、乙醇胺0.2ug/mL、FGF 10ng/mL、EGF10ng/mL、亞硒酸鈉0.05ug/mL、胰島素0.5ug/mL、β-巰基乙醇50nM、轉(zhuǎn)鐵蛋白2.5ug/mL、維生素C 2.5ug/mL、1×的L-Glu、1×的NEAA和1×的抗生素。

在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述抗生素為antibiotic-antimycotic。

在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，其配方由間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基、DMSO、甘油和海藻糖以100mL∶8～12g∶4～7g∶4～5g的比例組成。

進(jìn)一步優(yōu)選的，其配方由間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基、DMSO、甘油和海藻糖以100mL∶10g∶5g∶5g的比例組成。

本發(fā)明的有益效果是：