[發明專利]一種鱘源中間氣單胞菌AMth-1及PCR檢測引物及應用

有效

• 申請號: 201810324480.5
• 申請日: 2018-04-11
• 公開（公告）號: CN108424866B
• 公開（公告）日: 2021-05-28
• 發明（設計）人: 張書環;邸軍;黃君;杜浩;危起偉;周瓊
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院長江水產研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11;A61K39/02;A61P31/04;C12R1/01
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 龔瑩瑩

本發明屬于細菌檢測領域，具體公開了一種鱘源中間氣單胞菌AMth?1及PCR檢測引物及應用，發明人首次從中華鱘中分離出了一種中間氣單胞菌，該細菌為中間氣單胞菌（Aeromonas media）AMth?1，針對該細菌序列設計引物，F1：5'?GTTGATACCTAATACCTGYCAGC?3'，R1：5'?GGACTACCAGGGTATCTAATC?3'；F2：5'?CCAGCCCTGCGCCGACAA?3'，R2：5'?CACCAGGGTCGCCAGCGCTTCA?3'，對鱘源中間氣單胞菌進行檢測，該引物的特異性好，靈敏度高。

技術領域

本發明屬于細菌分子檢測技術領域，具體涉及一種鱘源中間氣單胞菌AMth-1及PCR 檢測引物及應用。

技術背景

氣單胞菌是一類兼性厭氧的革蘭氏陰性桿菌。早在1986年，Colwell等將氣單胞菌屬由弧菌科中分出，隸屬于新建的氣單胞菌科。迄今為止，氣單胞菌包括：嗜水氣單胞菌、豚鼠氣單胞菌、溫和氣單胞菌、維氏氣單胞菌和中間氣單胞菌等14個表型種和16個基因種。氣單胞菌在環境中分布廣泛，在水生生態系統中以嗜溫菌存在。中間氣單胞菌(Aeromonas media)，是氣單胞菌屬的一個種，最早于1983年在河水中發現，隨后在淤泥、廢水、動物體以及人體中都檢測到該細菌的存在。中間氣單胞菌是一種新發現的條件致病菌，可引起人類和動物的感染，人類的主要癥狀是腹瀉。中間氣單胞菌對水生動物致病的報道相對較少，僅王高學等(2007)報道了中間氣單胞菌引起刺參腐皮病；黃文明等(2013)報道了中間氣單胞菌引起胭脂魚發病；楊移斌等(2016)通過病原分離純化鑒定及人工感染等實驗,證實中間氣單胞菌可引起斑點叉尾鮰出血性死亡。

本申請中，申請人首次在人工養殖的中華鱘中發現中間氣單胞菌感染，感染癥狀主要為體表出血和內臟器官的廣泛出血。中華鱘和達氏鱘是我國長江流域現存的最為古老的魚類，屬于國家一級重點保護野生動物，中間氣單胞菌的發現對這兩種鱘魚的物種保護構成潛在威脅。因此，對鱘源中間氣單胞菌進行深入研究具有重要意義。

目前對氣單胞菌屬的研究主要集中在嗜水氣單胞菌(Aeromonashydrophila)，而對中間氣單胞菌的研究甚少。尚未有鱘源中間氣單胞菌的公開報道，也更無有效的檢測方法。

發明內容

本發明的目的在于提供了鱘源中間氣單胞菌(Aeromonas media)AMth-1，所述的中間氣單胞菌分離自中華鱘病變組織，該細菌已于2018年4月9日送至中國典型培養物保藏中心進行保藏，分類命名：中間產氣單胞菌(Aeromonas media)AMth-1，保藏編號：CCTC CNO:M2018185，地址：中國武漢武漢大學。

本發明的另一個目的在于提供了鱘源中間氣單胞菌AMth-1的特異性序列16SrRNA和c pn60，16SrRNA的核苷酸序列為SEQ ID NO.1所示，cpn60的核苷酸序列為SEQ ID NO. 2所示。

本發明還有一個目的在于提供了檢測鱘源中間氣單胞菌AMth-1的引物，所述的引物為 F1：5'-GTTGATACCTAATACCTGYCAGC-3'，R1：5'-GGACTACCAGGGTATCTAATC-3'；F 2：5'-CCAGCCCTGCGCCGACAA-3'，R2：5'-CACCAGGGTCGCCAGCGCTTCA-3'。

本發明還有一個目的在于提供了鱘源中間氣單胞菌AMth-1的應用，所述的應用包括利用該細菌制備成中間氣單胞菌細菌疫苗，或是制備成鱘源中間氣單胞菌的實驗室對照品，或是用于制備篩選治療鱘源中間氣單胞菌細菌病藥物的模型。

本發明的最后一個目的在于提供一種鱘源中間氣單胞菌AMth-1PCR檢測引物的應用，包括利用所述的引物制備成鱘源氣單胞菌檢測試劑盒。

為了達到上述目的，本發明采取以下技術措施：