[發明專利]微衛星序列穩定性檢測的標志物組合、引物組和試劑盒

在審

• 申請號: 201810323302.0
• 申請日: 2018-04-12
• 公開（公告）號: CN108315426A
• 公開（公告）日: 2018-07-24
• 發明（設計）人: 王明旭;王冬;石旺
• 申請（專利權）人: 北京信諾佰世醫學檢驗所有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京高文律師事務所 11359
• 代理人: 徐江華;孟昆

本發明屬于生物和醫療領域，提供用于微衛星序列穩定性檢測的標志物組合、引物組和試劑盒，其中標志物組合由標志物BAT 25、BAT 26、NR21、NR24、NR27和MONO27組成，引物組用于擴增這些標志物。本發明的標志物組合具有更高的靈敏度，效果直觀清晰，能夠為患者的用藥指導和預后預測提供更準確的分析和建議。

技術領域

本發明屬于生物和醫療領域，涉及結直腸癌的輔助檢測。

背景技術

結直腸癌(CRC)在世界范圍內是死亡率和發病率較高的腫瘤之一，約25％的CRC和遺傳相關。遺傳性非息肉性結直腸癌(HNPCC)是遺傳性結直腸癌中最主要的類型，是一種由DNA錯配修復基因(MMR)突變引起的顯性遺傳性疾病，約占CRC的3％～5％。

HNPCC發病早(～45歲)，病程進展迅速，但預后較其它類型結直腸癌好。HNPCC最重要的特征就是患者攜帶有MMR基因突變，攜帶有MMR基因突變的人群終生患CRC的風險高達80％，同時也是子宮內膜癌、卵巢癌以及胃癌等相關腫瘤的高風險人群。因此HNPCC早期的診斷對患者和其一級親屬非常重要，早期的診斷和治療能減少受HNPCC影響的家族成員65％的死亡率。

HNPCC的診斷可以通過臨床及家族調查以及直接以MMR基因突變檢測進行診斷。MMR基因突變是HNPCC患者最重要的分子特征，MMR缺陷會引起腫瘤細胞DNA發生微衛星序列不穩定性(Microsatellite Instability,MSI)，微衛星序列不穩定性包括有高度不穩定性(MSI-H)和低度不穩定性(MSI-L)，而如果微衛星序列穩定，稱之為MSS。HNPCC或HNPCC相關腫瘤中>90％的患者以及15％的散發性CRC中都發現有MSI。

MSI狀態還和CRC預后相關，MSI-H的CRC患者較其它類型患者預后好，同時，MSI狀態也和CRC患者的5-FU類藥物治療預后相關。中國結直腸癌診療規范(2010年版)中指出：Ⅱ期結直腸癌，有高危因素患者，建議進行輔助化療。但在輔助化療前，建議檢測MMR基因突變或MSI，如為MMR缺陷或MSI-H，不推薦氟尿嘧啶類藥物的單藥輔助化療。

最新的臨床研究數據表明：MSI-H的轉移性結直腸癌(mCRC)患者對PD-1免疫治療表現出高緩解率，而非MSI-H的mCRC患者對PD-1治療沒有表現出療效。因此，FDA(美國食品及藥品監管管理局)批準“PD-1免疫療法”可以作為擁有MSI-H的轉移性結直腸癌(mCRC)患者的潛在治療方案。隨著腫瘤免疫治療(PD-1/PD-L1)的熱烈開展，作為其伴隨診斷之一的MSI檢測也是其他實體瘤晚期患者所需的必要檢測。與高昂的免疫藥物相比，低廉的伴隨診斷可以快速并準確的評估其藥物收益的可能，具有很高的市場接受度。隨著國外藥物的引進和國內藥物的臨床試驗的成功，免疫治療已成為這些患者延續生命的重要治療手段，而作為伴隨診斷的MSI對于這些患者將是重要和必要的。

發明內容

本發明的目的，是提供一種新的MSI檢測方式，能夠準確、靈敏地檢測MSI。

本發明通過對BAT 25、BAT 26、NR21、NR24、NR27、MONO27標志物進行檢測，用以輔助HNPCC診斷及CRC患者預后評估。

本發明的手段是：選擇合適的基因標志物，設計特異性引物，其片段大小介于60-500之間，毛細管電泳時能區分開不同的片段。

因此，在第一個方面，本發明提供一種標志物組合，由標志物BAT 25、BAT 26、NR21、NR24、NR27和MONO27組成。所述標志物組合用于檢測微衛星序列穩定性。

其中，各標志物的序列分別為：

BAT25: