[發(fā)明專(zhuān)利]一種檢測(cè)組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶的電化學(xué)發(fā)光法拉第籠免疫傳感器

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810323247.5
• 申請(qǐng)日: 2018-04-03
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108562738B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-07-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 胡宇芳;張青青;徐利華;王嬌;饒家佳;郭智勇;王邃
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 寧波大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/535
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/535
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種檢測(cè)組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶的電化學(xué)發(fā)光法拉第籠免疫傳感器，其特征在于該電化學(xué)發(fā)光法拉第籠免疫傳感器通過(guò)以下方法構(gòu)建的：

首先，制備捕獲單元：合成磁性氧化石墨烯nanoFe₃O₄@GO，依次用EDC/NHS溶液、HCl處理，隨后與捕獲抗體-組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶第一抗體Ab₁結(jié)合，混合均勻，常溫孵育，最后加入BSA封閉GO表面的非特異性結(jié)合位點(diǎn)獲得捕獲單元Ab₁-nanoFe₃O₄@GO；

其次，制備信號(hào)單元：識(shí)別抗體-組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶第二抗體Ab₂連接DNA四面體中，合成四面體-Ab₂；再合成納米金AuNPs，使之與氧化石墨烯形成復(fù)合物GO@AuNPs，隨后與四面體-Ab₂結(jié)合，再加入Ru發(fā)光體，制得信號(hào)單元；

最后，制備法拉第籠免疫傳感器：取Ab₁-nanoFe₃O₄@GO滴涂于MGCE表面，得Ab₁-nanoFe₃O₄@GO/MGCE，記為電極a；取p300溶液滴涂于Ab₁-nanoFe₃O₄@GO/MGCE，得p300/Ab₁-nanoFe₃O₄@GO/MGCE，記為電極b；再取Ru-GO@AuNPs-四面體-Ab₂溶液滴涂于p300/Ab₁-nanoFe₃O₄@GO/MGCE，得Ru-GO@AuNPs-四面體-Ab₂/p300/Ab₁-nanoFe₃O₄@GO/MGCE，記為電極c，即為電化學(xué)發(fā)光法拉第籠免疫傳感器。

2.如權(quán)利要求1所述的電化學(xué)發(fā)光法拉第籠免疫傳感器，其特征是，制備氧化石墨烯nanoFe₃O₄@GO的具體方法是：取20～60mg氧化石墨烯GO于20～60mL二次水中，超聲15～45min后，加入25～75mL鐵離子混合溶液，快速攪拌，將上述混合溶液溫度升至75～95℃，在快速攪拌回流狀態(tài)下，逐滴加入20～30％氨水至溶液pH為10，并反應(yīng)30～60min，溶液顏色由棕色變?yōu)楹谏鋮s至室溫后，利用所得混合物的磁性，二次水反復(fù)清洗，直至上清液pH為中性，得到nanoFe₃O₄@GO溶液，用PBS定容至10～30mL，得濃度2mg/mL nanoFe₃O₄@GO的分散液；

其中，PBS濃度為0.1M，pH 7.4。

3.如權(quán)利要求1或2所述的電化學(xué)發(fā)光法拉第籠免疫傳感器，其特征是，合成捕獲單元Ab₁-nanoFe₃O₄@GO的具體方法是：取25～75μL合成的nanoFe₃O₄@GO于200μL離心管中，加入25～75μL新制備的EDC/NHS溶液，混合均勻后，滴加0.1M HCl至上述溶液pH為5.0；常溫孵育0.5～1.5h，使GO表面形成穩(wěn)定的活性酯層；基于磁性，用水快速洗滌直至上清液為中性；然后加入25～75μL 0.5×10^-3～1.5×10^-3mg/mL組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶第一抗體Ab₁溶液，混合均勻，常溫孵育2～6h；最后加入25～75μL 2wt％牛血清蛋白，孵育0.5～1.5h，目的是封閉GO表面的非特異性結(jié)合位點(diǎn)；利用磁性，水洗三次，即可獲得捕獲單元Ab₁-nanoFe₃O₄@GO；

其中，所述新制備的EDC/NHS溶液中EDC/NHS濃度分別為100μM/10μM。