[發明專利]一種快速檢測HIV-1的SPRi生物芯片制備方法及其應用

在審

• 申請號: 201810319150.7
• 申請日: 2018-04-11
• 公開（公告）號: CN108593601A
• 公開（公告）日: 2018-09-28
• 發明（設計）人: 汪海波;楊澤;莫秋華;陳新彬;廉國勝;史詠梅;馮子力;伍碧梅
• 申請（專利權）人: 珠海國際旅行衛生保健中心
• 主分類號: G01N21/552
• 分類號: G01N21/552
• 代理公司: 廣州市紅荔專利代理有限公司 44214
• 代理人: 王賢義;何承鑫

本發明旨在提供一種檢測特異性高、過程簡單、檢測時間短且無基因遺傳變異問題的快速檢測HIV?1的SPRi生物芯片制備方法及其應用。本發明方法包括以下步驟：用pH值為5.0的10mM 醋酸鈉對HIV?1 gp41蛋白和抗人IgG進行稀釋，使用接觸法點樣至CS金芯片，室溫環境作用16h；用蒸餾水對CS金芯片清洗后依次使用pH值為9.0的500μL 1M乙醇胺和pH值為1.85的10mM甘氨酸分別浸潤10min，制得快速檢測HIV?1的SPRi生物芯片；上述SPRi生物芯片可在快速檢測HIV?1相關蛋白中應用。本發明應用于生物檢測領域。

技術領域

本發明涉及生物檢測領域，尤其涉及一種快速檢測HIV-1(人類免疫缺陷病毒I型)相關蛋白的SPRi(表面等離子共振成像)生物芯片的制備及其應用。

背景技術

早檢測是對艾滋病等傳染病防控的前提，只有早檢測才能早發現并進行早治療。因此，開發快速、準確的檢測試劑對于傳染病的防控至關重要。目前艾滋病的檢測方法主要有金標試紙法、酶聯免疫吸附法（ELISA）、化學發光法、核酸檢測法等。

基于層析原理的金標法檢測試紙，其優點是可在15分鐘內得出結果，但是靈敏度與特異性都差。ELISA檢測試劑經歷過四次變革。第一代試劑盒于1985年3月面世，其原理為間接ELISA法，因而，靈敏度和特異性不高，出現許多假陰性和假陽性。1990年5月第二代使用基因重組或合成多肽抗原的HIV診斷試劑盒面世。第二代診斷試劑盒窗口期比第一代診斷試劑盒縮短了約20天，靈敏度和特異性也有所提高，但易發生漏檢。1994年出現的第三代HIV診斷試劑盒一改過去間接法檢測原理，利用雙抗原夾心法，靈敏度進一步提高，窗口期也進一步縮小了。第四代HIV診斷試劑盒是一種HIV-1/HIV-2抗體與HIV-1 O亞群抗體及p24抗原的聯合檢測方法。相比于第三代篩查試劑，它由于增加了p24抗原的檢測，極大地縮短了檢測的窗口期。但是這些ELISA檢測試劑一般需要2小時左右才能知道檢測結果。化學發光法目前應用的艾滋病檢測試劑盒主要有HIV P24抗原和HIV-1/2抗體做定性檢測，從檢測窗口期方面等同于ELISA四代試劑，但是更精準，但檢測成本更高一些。近年來發展起來的核酸檢測技術能夠特異的在核酸水平檢測出艾滋病毒，但該法需要歷經核酸提取、PCR擴增、電泳檢測等步驟，耗時較長，人員技術要求高,并且由于HIV-1病毒基因序列變異很快，檢測探針不能滿足要求，經常會出現漏檢或者假陰性結果。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是克服現有技術的不足，提供一種檢測特異性高、過程簡單、檢測時間短且無基因遺傳變異問題的快速檢測HIV-1的SPRi生物芯片制備方法及其應用。

本發明所采用的技術方案是，本發明方法包括以下步驟：

（1）用pH值為5.0的10mM 醋酸鈉對HIV-1 gp41蛋白和抗人IgG進行稀釋，使用接觸法點樣至CS金芯片，室溫環境作用16h；

（2）用蒸餾水對CS金芯片清洗后依次使用pH值為9.0的500μL 1M乙醇胺和pH值為1.85的10mM甘氨酸分別浸潤10min，制得快速檢測HIV-1的SPRi生物芯片，可上機使用。

上述方案可見，由本發明方法制得的用于檢測HIV-1的SPRi生物芯片，對HIV-1相關蛋白的測定顯示了快速、簡便、特異性好、穩定的能力。與現有技術比較，本發明具有免標記、可實時監測、快速、操作簡單、檢測周期短、特異性好等特點。

進一步地，對于使用后的快速檢測HIV-1的SPRi生物芯片，還包括芯片再生步驟：將pH值為1.85的200μL 10mM甘氨酸注射入加樣口，以清除已結合在芯片表面的物質，使芯片再生和重復利用。

上述方案可見，通過芯片再生和重復使用，避免了芯片的浪費，大大地節省了成本。