[發(fā)明專利]一種抗病毒蛋白MxA診斷試劑盒及其制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810317203.1
• 申請日: 2018-04-10
• 公開（公告）號: CN108445233A
• 公開（公告）日: 2018-08-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張杰;孫威
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽金標(biāo)點(diǎn)生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明公開了一種抗病毒蛋白MxA診斷試劑盒及其制備方法，其特征是運(yùn)用量子點(diǎn)技術(shù)、微球技術(shù)、中頻超聲技術(shù)、懸浮技術(shù)、封閉技術(shù)、標(biāo)記技術(shù)，制備了一種MxA診斷試劑盒，適用范圍寬、可用于臨床、操作簡單、精密度高、檢測用時(shí)較短、靈敏度高、有效期長、成本低廉、作用安全，取得了滿意效果。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及診斷試劑盒制備領(lǐng)域，具體涉及一種抗病毒蛋白MxA診斷試劑盒及其制備方法。

背景技術(shù)

MxA是由干擾素（IFN）誘導(dǎo)產(chǎn)生的一種78kD抗病毒蛋白，是區(qū)分機(jī)體是否受到病毒感染亦或細(xì)菌感染的特異性指標(biāo)，同時(shí)也是評價(jià)干擾素治療效果的重要標(biāo)準(zhǔn)。快速檢測機(jī)體MxA水平對于疾病診斷、合理用藥、評價(jià)療效具有重要意義。現(xiàn)有的MxA診斷試劑盒多為酶聯(lián)免疫法，存在適用范圍窄、不可用于臨床、操作復(fù)雜、精密度低、耗時(shí)較長、靈敏度低、有效期短、成本高、作用不安全等不足。本發(fā)明依據(jù)多年診斷試劑盒研發(fā)經(jīng)驗(yàn)，綜合運(yùn)用量子點(diǎn)技術(shù)、微球技術(shù)、中頻超聲技術(shù)、懸浮技術(shù)、封閉技術(shù)、標(biāo)記技術(shù)，提供了一種MxA診斷試劑盒制備方案，適用范圍寬、可用于臨床、操作簡單、精密度高、用時(shí)較短、靈敏度高、有效期長、成本低廉、作用安全，取得了滿意效果。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供一種MxA診斷試劑盒及其制備方法。

發(fā)明實(shí)施方案如下：

量子點(diǎn)熒光微球混懸液的制備：

取4ml濃度為5mg/ml的 CdSe/ZnS量子點(diǎn)甲苯溶液，13000轉(zhuǎn)離心10 分鐘，棄去上清液，得沉淀，加入含120mg聚甲基丙烯酸甲酯和80mg聚馬來酸酐十八醇酯的三氯甲烷液2ml，加入濃度為3mg/ml的十二烷基磺酸鈉水溶液5ml，混合10～20分鐘，置超聲反應(yīng)器中，選擇頻率25kHz超聲勻質(zhì)2分鐘，得乳液，室溫100轉(zhuǎn)旋蒸4小時(shí)，除去三氯甲烷，剩余液體10000轉(zhuǎn)離心10分鐘，得沉淀，用5ml注射用水10000轉(zhuǎn)離心10分鐘洗滌兩次，加0.2%疊氮鈉水溶液2ml，置超聲反應(yīng)器中，選擇頻率45kHz超聲1～2分鐘，得濃度為10mg/ml的量子點(diǎn)熒光微球混懸液，2℃～8℃ 貯藏；

量子點(diǎn)熒光微球標(biāo)記探針的制備：

取0.1ml濃度為10mg/ml的量子點(diǎn)熒光微球混懸液，4℃10000轉(zhuǎn)離心10分鐘，得沉淀，加入1ml濃度為10mMol、pH值為6.5的磷酸緩沖液使懸浮，加入150μg碳二亞胺，混合10～20分鐘，加入100μgN-羥基琥珀酰亞胺，混合10～20分鐘，室溫反應(yīng)40分鐘，4℃10000轉(zhuǎn)離心10分鐘，得沉淀，加入1ml濃度為10mMol、pH值為6.5的磷酸緩沖液使懸浮，加入100μg的抗MxA單克隆標(biāo)記抗體，混合10～20分鐘，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)60分鐘，4℃10000轉(zhuǎn)離心10分鐘，得沉淀，加入1ml含0.5%牛血清白蛋白，20mMol乙醇胺的濃度為10mMol、pH值為7.5的磷酸緩沖液使懸浮，混合10～20分鐘，室溫旋蒸反應(yīng)2小時(shí)，4℃10000轉(zhuǎn)離心10分鐘，得沉淀，置超聲反應(yīng)器中，加入0.1ml濃度為10mMol、pH值為6.5的磷酸緩沖液，選擇頻率45kHz超聲1分鐘，使懸浮，2℃～8℃貯藏，得量子點(diǎn)熒光微球標(biāo)記探針；

NC膜的噴涂劃線：

將濃度為0.5mg/ml的羊抗鼠二抗以1μl/mm的噴量噴涂于NC膜的質(zhì)控線，將濃度為1mg/ml的鼠抗人MxA單克隆包被抗體以1μl/mm的噴量噴涂于NC膜的檢測線，質(zhì)控線與檢測線相距4mm，37℃ 干燥12小時(shí)，得噴涂后的NC膜；

量子點(diǎn)熒光微球標(biāo)記墊的制備：

取量子點(diǎn)熒光微球標(biāo)記探針，10000轉(zhuǎn)離心10分鐘，得沉淀，置超聲反應(yīng)器中，加入0.1ml含5%蔗糖，1%牛血清白蛋白，0.5%吐溫-20，1%聚乙二醇2000,濃度為10mMol、pH值為7.4的磷酸緩沖液，選擇頻率60kHz超聲1分鐘，使懸浮，以5μl/cm的噴量噴涂于標(biāo)記墊上，37℃ 干燥12小時(shí)，得量子點(diǎn)熒光微球標(biāo)記墊；