[發(fā)明專利]一種酪酸梭菌與嗜酸乳桿菌聯合發(fā)酵制備復合益生菌制劑的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810316721.1
• 申請日: 2018-04-10
• 公開（公告）號: CN108676739A
• 公開（公告）日: 2018-10-19
• 發(fā)明（設計）人: 王凱鴻
• 申請（專利權）人: 凱磊（北京）科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/145;C12R1/23
• 代理公司: 北京知呱呱知識產權代理有限公司 11577
• 代理人: 呂學文;武媛

1.一種酪酸梭菌與嗜酸乳桿菌聯合發(fā)酵制備復合益生菌制劑的方法，其特征在于：所述方法包括以下步驟：

(1)酪酸梭菌菌種擴增：將酪酸梭菌置于擴增培養(yǎng)基1中，在34～38℃厭氧環(huán)境下培養(yǎng)20～28h，得到擴增的酪酸梭菌菌種；

(2)嗜酸乳桿菌菌種擴增：將嗜酸乳桿菌置于擴增培養(yǎng)基2中，在34～38℃厭氧環(huán)境下培養(yǎng)20～28h，得到擴增的嗜酸乳桿菌菌種；

(3)酪酸梭菌二級菌種的制備：將酪酸梭菌菌種置于種子培養(yǎng)基1中，在34～38℃厭氧環(huán)境下培養(yǎng)20～28h，得到酪酸梭菌一級菌種；將酪酸梭菌一級菌種置于種子培養(yǎng)基1中，在34～38℃厭氧環(huán)境下培養(yǎng)20～28h，得到酪酸梭菌二級菌種；

(4)嗜酸乳桿菌二級菌種的制備：將嗜酸乳桿菌菌種置于種子培養(yǎng)基2中，在34～38℃厭氧環(huán)境下培養(yǎng)20～28h，得到嗜酸乳桿菌一級菌種；將嗜酸乳桿菌一級菌種置于種子培養(yǎng)基2中，在34～38℃厭氧環(huán)境下培養(yǎng)20～28h，得到嗜酸乳桿菌二級菌種；

(5)聯合培養(yǎng)：將酪酸梭菌二級菌種和嗜酸乳桿菌二級菌種共同接種于液體共生培養(yǎng)基中，在34～38℃厭氧環(huán)境下培養(yǎng)20～28h，得到聯合培養(yǎng)菌種；

(6)固體發(fā)酵：將聯合培養(yǎng)菌種接種于固體共生培養(yǎng)基中，在34～38℃厭氧環(huán)境下培養(yǎng)20～28h，即完成本發(fā)明的酪酸梭菌與嗜酸乳桿菌聯合發(fā)酵制備復合益生菌制劑的操作。

2.根據權利要求1所述的酪酸梭菌與嗜酸乳桿菌聯合發(fā)酵制備復合益生菌制劑的方法，其特征在于：所述步驟(1)中擴增培養(yǎng)基1的原料包括：胰蛋白胨20～25g/L，牛肉浸膏10～12g/L，酵母膏2～6g/L，葡萄糖3～5g/L，磷酸氫二鉀2～3g/L，磷酸二氫鉀2～4g/L，硫酸鎂0.2～0.5g/L，氯化鈣0.1～0.2g/L，硫酸亞鐵0.8～1g/L，半胱氨酸鹽酸鹽0.3～0.6g/L；

所述擴增培養(yǎng)基1的pH值為7.2～7.4。

3.根據權利要求1所述的酪酸梭菌與嗜酸乳桿菌聯合發(fā)酵制備復合益生菌制劑的方法，其特征在于：所述步驟(2)中擴增培養(yǎng)基2為液體乳酸細菌培養(yǎng)基。

4.根據權利要求1所述的酪酸梭菌與嗜酸乳桿菌聯合發(fā)酵制備復合益生菌制劑的方法，其特征在于：所述步驟(3)中種子培養(yǎng)基1的原料包括：胰蛋白胨20～25g/L，牛肉浸膏10～12g/L，酵母膏2～6g/L，葡萄糖3～5g/L，磷酸氫二鉀2～3g/L，磷酸二氫鉀2～4g/L，硫酸鎂0.2～0.5g/L，氯化鈣0.1～0.2g/L，硫酸亞鐵0.8～1g/L，半胱氨酸鹽酸鹽0.3～0.6g/L；

所述擴增培養(yǎng)基1的pH值為7.2～7.4。

5.根據權利要求1所述的酪酸梭菌與嗜酸乳桿菌聯合發(fā)酵制備復合益生菌制劑的方法，其特征在于：所述步驟(4)中種子培養(yǎng)基2為液體乳酸細菌培養(yǎng)基。

6.根據權利要求1所述的酪酸梭菌與嗜酸乳桿菌聯合發(fā)酵制備復合益生菌制劑的方法，其特征在于：所述步驟(5)中液體共生培養(yǎng)基的原料包括：蛋白胨10～12g/L，牛肉浸膏10～12g/L，酵母膏2～6g/L，葡萄糖15～18g/L，乙酸鈉5～7g/L，吐溫-80 10～12mL/L，七水硫酸錳0.01～0.02g/L，磷酸二氫鉀2～4g/L，硫酸鎂0.2～0.5g/L，氯化鈣0.1～0.2g/L，半胱氨酸鹽酸鹽0.3～0.6g/L；

所述液體共生培養(yǎng)基的pH值為7.2～7.4。

7.根據權利要求1所述的酪酸梭菌與嗜酸乳桿菌聯合發(fā)酵制備復合益生菌制劑的方法，其特征在于：所述步驟(6)中固體共生培養(yǎng)基的原料按照質量份數包括：豆粕80～100份，玉米粉30～50份，山楂10～15份，紅糖5～8份，甘草2～4份，磷酸二氫鉀0.01～0.03份，酵母膏1.5～1.8份。

8.根據權利要求1所述的酪酸梭菌與嗜酸乳桿菌聯合發(fā)酵制備復合益生菌制劑的方法，其特征在于：所述步驟(1)和步驟(2)中接種量為3g/L，所述步驟(3)和步驟(4)的接種量為10mL/L，所述步驟(5)中酪酸梭菌二級菌種和嗜酸乳桿菌二級菌種的接種量均為10mL/L，所述步驟(6)中聯合培養(yǎng)菌種的接種量為10mL/kg。