[發(fā)明專利]一種豬流行性腹瀉病毒的變異毒株及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810316634.6
• 申請日: 2018-04-10
• 公開（公告）號: CN108517318B
• 公開（公告）日: 2021-11-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 閆若潛;班付國;王華俊;趙雪麗;謝彩華;馬震原;王淑娟;劉梅芬;陳慧娟;趙月龍;楊朋霞
• 申請（專利權(quán)）人: 河南省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;A61K39/215;A61P31/14;C12R1/93
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;王璐

本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，涉及豬流行性腹瀉病毒的變異毒株(PEDV?HNCADC?2017，保藏編號為CCTCC NO：V201766)及其應(yīng)用。本發(fā)明所述變異毒株在10％血清培養(yǎng)基的VERO細(xì)胞中傳代至156代，其TCID₅₀可達(dá)10^7.7/0.1mL，毒價(jià)較高，能與豬陽性血清和Balb/c小鼠陽性血清反應(yīng)，免疫熒光反應(yīng)較強(qiáng)。由其制備的弱毒活疫苗可用于豬流行性腹瀉病的預(yù)防，抗體產(chǎn)生快，免疫后2周能產(chǎn)生較高的抗體水；由其制備的滅活疫苗安全性高，免疫后不排毒，可用于母豬和1日齡仔豬豬流行性腹瀉病的防控。當(dāng)采用二者聯(lián)合免疫，可顯著提高免疫效果。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，涉及豬流行性腹瀉病毒的變異毒株及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

豬流行性腹瀉(Porcine epidemic diarrhea，PED)是由豬流行性腹瀉病毒(Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)引起的以腹瀉、嘔吐和脫水為特征的豬腸道傳染病。該病多發(fā)生在冬春寒冷季節(jié)，哺乳仔豬、架子豬或育肥豬等各年齡段均可發(fā)病，但哺乳仔豬發(fā)病和死亡最為嚴(yán)重，病死率高達(dá)90％～100％，給養(yǎng)豬業(yè)帶來了嚴(yán)重的危害和經(jīng)濟(jì)損失。20世紀(jì)70年代，英國首次報(bào)道PED，以后相繼在比利時(shí)、德國、加拿大、日本、瑞士等多個(gè)國家報(bào)道了該病的發(fā)生與流行。20世紀(jì)80年代后，該病開始在亞洲一些養(yǎng)豬國家流行，中國也多次報(bào)道了豬流行性腹瀉，尤其是2010年以來，豬流行性腹瀉在我國重新出現(xiàn)，并大范圍爆發(fā)流行，表現(xiàn)為哺乳仔豬的高發(fā)病率和高死亡率，給我國養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。2013年以來，PED在美國豬群中爆發(fā)疫情，并迅速波及到整個(gè)美國和一些相鄰的國家，經(jīng)濟(jì)損失在9～18億美元。

PEDV屬于冠狀病毒科冠狀病毒屬α冠狀病毒，該病毒屬于單股正義RNA病毒，基因組全長約28Kb，至少編碼7個(gè)開放閱讀框，編碼順序?yàn)?’UTR-ORF1a-ORF1b-S-ORF3-E-M-N-3’UTR，分別編碼主要結(jié)構(gòu)蛋白：復(fù)制酶多聚蛋白lab(pplab)、纖突蛋白(S)、ORF3蛋白、小膜蛋白(E)、膜糖蛋白(M)和核衣殼蛋白(N)，其中N蛋白在病毒的感染細(xì)胞過程中產(chǎn)量最高，是病毒誘導(dǎo)機(jī)體免疫的主要優(yōu)勢抗原。

2014年以來，我國豬流行性腹瀉病流行依然嚴(yán)重，主要危害初生仔豬，病死率較高，給養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大的損失，當(dāng)前主要采用病料返飼、自家苗或商品化疫苗防控該病，但是效果不一，易造成排毒散毒。因此，開發(fā)含有流行株豬流行性腹瀉病毒抗原、在細(xì)胞中穩(wěn)定傳代、且免疫源性好的疫苗成為當(dāng)前防控該病的首要任務(wù)。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明的目的是提供一種豬流行性腹瀉病毒的變異毒株及其應(yīng)用。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

第一方面，本發(fā)明提供一種豬流行性腹瀉病毒PEDV-HNCADC-2017株，已于2017年11月22日在湖北省武漢市武漢大學(xué)內(nèi)的中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)保藏，其保藏編號為CCTCC NO：V201766。

所述豬流行性腹瀉病毒PEDV-HNCADC-2017株作為一種豬流行性腹瀉病毒的變異毒株，在10％血清培養(yǎng)基的VERO細(xì)胞中傳代至156代，其TCID₅₀可達(dá)10^7.7/0.1mL，毒價(jià)較高，可用于制備豬流行性腹瀉弱毒活疫苗或(和)滅活疫苗。

進(jìn)一步地，基于所述豬流行性腹瀉病毒PEDV-HNCADC-2017株的特性，本發(fā)明提供了所述豬流行性腹瀉病毒PEDV-HNCADC-2017株在制備治療/預(yù)防豬流行性腹瀉的藥物方面的應(yīng)用。

作為一種具體的應(yīng)用，所述藥物可為疫苗，所述疫苗的抗原成分來自豬流行性腹瀉病毒PEDV-HNCADC-2017株，包括但不限于其核衣殼蛋白。

進(jìn)一步地，所述疫苗可為弱毒活疫苗或滅活疫苗。