[發明專利]一種枯草芽孢桿菌互補培養的菌種加密性菌劑生產方法

有效

• 申請號: 201810316006.8
• 申請日: 2018-04-10
• 公開（公告）號: CN108531435B
• 公開（公告）日: 2020-09-22
• 發明（設計）人: 張學文;陳金軍;趙燕;羅慧敏;黃麗華;高晗
• 申請（專利權）人: 湖南農業大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/75;C12R1/125
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

1.一種枯草芽孢桿菌互補培養的菌種加密性菌劑生產方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)、基因編輯法定向突變和/或敲除生產枯草芽孢桿菌的特定營養基因，構建基因編輯載體；

2)、將構建的基因編輯載體轉化到目標枯草芽孢桿菌，并從中篩選特定營養基因編輯改造的營養缺陷型的枯草芽孢桿菌作為生產菌；

3)、針對性篩選能分泌表達步驟2)所述特定營養物的普通枯草芽孢桿菌，作為營養菌；

4)、分別培養所述生產菌與營養菌，作為菌劑生產發酵的種子菌；

5)、將營養菌和生產菌混合進行菌劑生產的規模培養即得。

2.根據權利要求1所述的枯草芽孢桿菌互補培養的菌種加密性菌劑生產方法，其特征在于，所述枯草芽孢桿菌的特定營養基因包括簡單營養物合成代謝相關酶的基因。

3.根據權利要求1所述的枯草芽孢桿菌互補培養的菌種加密性菌劑生產方法，其特征在于，所述枯草芽孢桿菌的特定營養基因包括氨基酸合成酶基因、核苷酸合成酶基因或生物素合成酶基因的一種或幾種。

4.根據權利要求1所述的枯草芽孢桿菌互補培養的菌種加密性菌劑生產方法，其特征在于，所述基因編輯法包括采用CRISPR-Cas9系統針對特定營養基因的基因編輯方法。

5.根據權利要求1所述的枯草芽孢桿菌互補培養的菌種加密性菌劑生產方法，其特征在于，所述構建的基因編輯載體轉化到目標枯草芽孢桿菌之前，還包括使用低劑量紫外線照射促進枯草芽孢桿菌轉化的步驟。

6.根據權利要求1所述的枯草芽孢桿菌互補培養的菌種加密性菌劑生產方法，其特征在于，所述步驟4)中所述營養菌的培養基分別為基本培養基；所述生產菌的培養基為豐富培養基或者添加所述特定營養物的基本培養基。

7.根據權利要求1所述的枯草芽孢桿菌互補培養的菌種加密性菌劑生產方法，其特征在于，所述營養菌和生產菌的混合，營養菌為生產菌發酵提供所缺營養。

8.根據權利要求1～7任意一項所述的枯草芽孢桿菌互補培養的菌種加密性菌劑生產方法，其特征在于，所述目標枯草芽孢桿菌為商業化菌劑的枯草芽孢桿菌。

9.根據權利要求1～7任意一項所述的枯草芽孢桿菌互補培養的菌種加密性菌劑生產方法，其特征在于，所述目標枯草芽孢桿菌為作為菌劑直接生產使用的活菌劑。