[發明專利]西瓜籽粒大小基因及其SNP分子標記和應用

有效

• 申請號: 201810315311.5
• 申請日: 2018-04-10
• 公開（公告）號: CN108456684B
• 公開（公告）日: 2021-07-09
• 發明（設計）人: 李娜;馬雙武;尚建立;王吉明;周丹;李楠楠
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院鄭州果樹研究所
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C07K14/415;C12N15/11;C12Q1/6895;C12Q1/686
• 代理公司: 河南科技通律師事務所 41123
• 代理人: 張曉輝;樊羿

1.一種西瓜籽粒大小相關的SNP位點的dCAPs分子標記，其特征在于，其上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，其下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

2.依據權利要求1所述SNP位點的dCAPs分子標記，其特征在于，所述引物酶切反應所用限制性內切酶為TagI。

3.一種西瓜籽粒大小基因型的鑒定方法，其特征在于，包括以下步驟：

a. DNA提?。豪肅TAB法提取西瓜植株總DNA；

b. PCR擴增：

反應體系為：100 ng/μL西瓜植株總DNA 1μL、權利要求1所述上游引物 1 μL、權利要求1所述下游引物 1 μL、2×Power Taq PCR MasterMix 12.5 μL、ddH₂O 9.5 μL；

反應程序為：94℃ 5 min，35個循環的94℃ 20 s、55℃ 1 min、72℃ 30 s、72℃ 5min；

c. 酶切反應體系和程序：

反應體系為：PCR產物5 μl，TagI限制性內切酶0.5μl，10×buffer 1.5 μl，ddH₂O 8 μl；

反應程序為：65℃恒溫處理10小時；

d.電泳圖譜分析：對所述酶切產物進行聚丙烯酰胺凝膠電泳、顯影、染色和帶型判讀，找到目標條帶，根據擴增產物的條帶大小及位置關系確定所屬基因型，142bp的條帶代表大籽?；蛐?，113bp的條帶代表小籽?；蛐汀?/p>

4.權利要求1所述的dCAPs分子標記在西瓜籽粒大小輔助篩選和育種中的應用。

5.依據權利要求4所述應用，其特征在于，包括如下步驟：

（1）對F₂群體每個株系利用權利要求1所述的dCAPs分子標記進行基因型鑒定；

（2）利用上述（1）中F₂群體的基因型鑒定結果，根據分子標記的基因型對不同單株進行分類，并利用籽粒表型數據進行鑒定和驗證。