[發(fā)明專利]人類MTHFR和MTRR基因檢測(cè)試劑盒及其用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810314910.5
• 申請(qǐng)日: 2018-04-09
• 公開（公告）號(hào): CN108251522B
• 公開（公告）日: 2020-11-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 巫益鳴;胡艷民;徐加發(fā);劉中華;王國(guó)強(qiáng)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇碩世生物科技股份有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6883
• 分類號(hào): C12Q1/6883;C12Q1/6886
• 代理公司: 北京超凡志成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11371
• 代理人: 李進(jìn)

1.一種人類MTHFR和MTRR基因檢測(cè)試劑盒，其特征在于，包括MTHFR 677/MTHFR 1298/MTRR 66三重檢測(cè)液以及以下組分：核酸擴(kuò)增反應(yīng)液、酶混合液、陽性對(duì)照和空白對(duì)照；

其中，所述的MTHFR 677/MTHFR 1298/MTRR 66三重檢測(cè)液包括以下3組組分：

組分(1)：由檢測(cè)MTHFR基因677位點(diǎn)一對(duì)引物對(duì)和一條探針組成，其中，所述的引物對(duì)的堿基序列分別為SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示；所述探針的堿基序列如SEQ ID No.3所示，其中，SEQ ID No.3的5′端標(biāo)記有熒光報(bào)告基團(tuán)，3′端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán)；

組分(2)：由檢測(cè)MTHFR基因1298位點(diǎn)一對(duì)引物對(duì)和一條探針組成，其中，所述的引物對(duì)的堿基序列分別為SEQ ID No.4和SEQ ID No.5所示；所述探針的堿基序列如SEQ ID No.6所示，其中，SEQ ID No.6的5′端標(biāo)記有熒光報(bào)告基團(tuán)，3′端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán)；

組分(3)：由檢測(cè)MTRR基因66位點(diǎn)一對(duì)引物對(duì)和一條探針組成，其中，所述的引物對(duì)的堿基序列分別為SEQ ID No.7和SEQ ID No.8所示；所述探針的堿基序列如SEQ ID No.9所示，其中，SEQ ID No.9的5′端標(biāo)記有熒光報(bào)告基團(tuán)，3′端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán)；

其中，所述熒光報(bào)告基團(tuán)選自FAM、VIC、ROX、Cy3或Cy5熒光報(bào)告基團(tuán)，且組分(1)、組分(2)以及組分(3)選自不同的熒光報(bào)告基團(tuán)；熒光淬滅基團(tuán)選自BHQ1、BHQ2、BHQ3、Dabcyl和Tamra中的任意一種或幾種。

2.按照權(quán)利要求1所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于：組分(1)中引物及探針之間的配比為：SEQ ID No.1所示的引物:SEQ ID No.2所示的引物:SEQ ID No.3所示的探針＝0.125μM:1μM:0.5μM。

3.按照權(quán)利要求1所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于：組分(2)中引物及探針之間的配比為：SEQ ID No.4所示的引物:SEQ ID No.5所示的引物:SEQ ID No.6所示的探針＝0.125μM:1μM:0.5μM。

4.按照權(quán)利要求1所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于：組分(3)中引物及探針之間的配比為：SEQ ID No.7所示的引物：SEQ ID No.8所示的引物:SEQ ID No.9所示的探針＝0.125μM:1μM:0.5μM。

5.按照權(quán)利要求1所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述的核酸擴(kuò)增反應(yīng)液包括以下組分中的任意一種或多種的組合:PCR緩沖液、MgCl₂、dATP、dTTP、dCTP、dGTP、dUTP、以及去DNA酶水。

6.按照權(quán)利要求1所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述的酶混合液包括以下組分中的任意一種或多種的組合：DNA聚合酶和UDG酶；

所述DNA聚合酶是化學(xué)修飾酶；所述UDG酶是E.coli尿嘧啶-DNA糖基化酶。

7.按照權(quán)利要求1所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述的陽性對(duì)照為6種質(zhì)粒DNA，所述6種質(zhì)粒DNA分別為4種不同的MTHFR等位基因和2種不同的MTRR 66位點(diǎn)等位基因，所述的空白對(duì)照為去DNA酶水，其中，4種不同的MTHFR等位基因包括2種不同的MTHFR 677位點(diǎn)等位基因和2種不同的MTHFR 1298位點(diǎn)等位基因。