[發明專利]一種傳染性法氏囊病病毒VP2基因陽離子微球疫苗及其制備方法

在審

• 申請號: 201810314793.2
• 申請日: 2018-04-10
• 公開（公告）號: CN108478787A
• 公開（公告）日: 2018-09-04
• 發明（設計）人: 何秀苗;韋平;陳果;陳盛峰;陳艷艷;陳博文
• 申請（專利權）人: 廣西民族大學
• 主分類號: A61K39/12
• 分類號: A61K39/12;A61K9/50;A61K47/34;A61P31/14
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;何葉喧

本發明公開了一種傳染性法氏囊病病毒VP2基因陽離子微球疫苗及其制備方法。本發明提供了一種微球，由陽離子聚乳酸?乙醇酸共聚物微球和包覆在其內部的核酸分子組成；所述核酸分子為具有傳染性法氏囊病病毒VP2基因的線性核酸分子或具有傳染性法氏囊病病毒VP2基因的環形核酸分子。本發明提供的微球可制備傳染性法氏囊病病毒疫苗。本發明制備方法簡單，生產成本低，適于大規模生產。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種傳染性法氏囊病病毒VP2基因陽離子微球疫苗及其制備方法。

背景技術

傳染性法氏囊病是由傳染性法氏囊病病毒引起的一種急性、高度接觸性和溶淋巴細胞性傳染病。該病毒主要侵染雞的中樞免疫器官—法氏囊，引起雛雞法氏囊的B前淋巴細胞變性壞死和不同程度的免疫機能抑制，最終導致雞群感染其他致病因子并最終死亡，雞群的發病和死亡嚴重影響了養禽業的健康發展。

傳染性法氏囊病病毒屬雙節段的RNA病毒科，禽雙RNA病毒屬。其基因組由A、B兩個雙鏈RNA節段組成，其中位于A節段的VP2核苷酸序列編碼的VP2蛋白是主要的宿主保護性抗原，可以誘導宿主產生保護性中和抗體。

預防傳染性法氏囊病，一般使用減毒活疫苗或滅活疫苗，減毒活疫苗的效果要優于滅活疫苗。但是減毒活疫苗仍然對雛雞有一定的毒力，使用上存在散毒的風險。DNA疫苗作為第三次疫苗革命的產物，應用時不受母源抗體干擾，可誘導機體產生體液免疫和細胞免疫，全面誘導機體的免疫應答反應，且具有免疫原性強，交叉保護性好等特點。然而DNA疫苗在進入機體后容易被體內環境所破壞，導致其不能發揮有效的免疫作用，需要通過相應的保護方法使DNA疫苗在發揮有效作用前不被降解。因此引入可延緩DNA疫苗降解的生物高分子，作為保護DNA疫苗的載體，是一種既安全又有效的策略。

聚乳酸-羥基乙醇酸由兩種單體——乳酸和羥基乙醇酸隨機聚合而成，是一種可降解的功能高分子有機化合物，具有良好的生物相容性，無毒副作用。由聚乳酸-羥基乙醇酸制作的微球具有延緩藥物釋放時間，保護藥物完整性和免疫活性的作用，被廣泛應用于藥物載體的研究。

發明內容

本發明的目的是提供一種傳染性法氏囊病病毒VP2基因陽離子微球疫苗及其制備方法。

本發明提供了一種微球，由陽離子聚乳酸-乙醇酸共聚物微球和包覆在其內部的核酸分子組成；所述核酸分子為具有傳染性法氏囊病病毒VP2基因的線性核酸分子或具有傳染性法氏囊病病毒VP2基因的環形核酸分子。

本發明還保護一種微球的制備方法，包括如下步驟：采用陽離子聚乳酸-乙醇酸共聚物微球包覆核酸分子，得到微球；所述核酸分子為具有傳染性法氏囊病病毒VP2基因的線性核酸分子或具有傳染性法氏囊病病毒VP2基因的環形核酸分子。

本發明還保護一種微球的制備方法，包括如下步驟：將陽離子聚乳酸-乙醇酸共聚物微球與核酸分子混合后震蕩、離心，收集沉淀，沉淀采用水洗滌后冷凍干燥，得到所述微球；所述核酸分子為具有傳染性法氏囊病病毒VP2基因的線性核酸分子或具有傳染性法氏囊病病毒VP2基因的環形核酸分子。

以上任一所述陽離子聚乳酸-乙醇酸共聚物微球是將聚乳酸-乙醇酸共聚物在陽離子表面活性劑的作用下制備得到的微球。

所述陽離子表面活性劑具體可為十六烷基三甲基溴化銨。

所述聚乳酸-乙醇酸共聚物的端基可以為羥基，聚乳酸-乙醇酸共聚物具體可為端羥基聚(外消旋乳酸－乙醇酸)共聚物(特征粘度具體可為0.45-0.55，分子量具體可為60kd，乳酸和乙醇酸的含量比具體可為50：50)。所述端羥基聚(外消旋乳酸－乙醇酸)共聚物具體可為濟南岱罡生物工程有限公司，型號：DG-50DLGOH055的產品。