[發明專利]一種以瓊脂為凝固劑的低pH固體培養基的配制方法

在審

• 申請號: 201810313449.1
• 申請日: 2018-04-10
• 公開（公告）號: CN108504576A
• 公開（公告）日: 2018-09-07
• 發明（設計）人: 朱艷;張衛兵;楊積鵬;曹磊;馬江;羅俏俏;曹瑛瑛
• 申請（專利權）人: 甘肅農業大學
• 主分類號: C12N1/00
• 分類號: C12N1/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供一種以瓊脂為凝固劑的低pH固體培養基的配制方法，包括如下步驟：無菌HCl溶液的制備、培養基的配制、培養基的滅菌、pH的調節和無菌檢查。該方法具有方法簡單、易操作、實用等優點。采用該方法制備的培養基凝固性良好、酸度易于控制、無污染、適用范圍廣等優點，同時可以避免采用傳統方法配制時低pH條件下以瓊脂為凝固劑的培養基不能凝固的缺陷。

技術領域

本發明屬于微生物領域，具體涉及一種以瓊脂為凝固劑的低pH固體培養基的配制方法。

背景技術

固體培養基是微生物培養常用的培養基，在液體培養基的基礎上加入適當的凝固劑，瓊脂熔化后調節至需要的pH，再經過高壓蒸汽滅菌后制備而成。瓊脂是多糖類聚合物，具有凝固點高、含氮量低，凝固后可再融化、不易被微生物分解利用的特點，因而成為固體培養基配制時最為常用的凝固劑。然而在低pH（pH＜4.0）條件下，瓊脂在滅菌時可被水解成低聚糖和還原糖，其凝固性喪失，導致以瓊脂為凝固劑的固體培養基在低pH條件下（pH＜4.0）不能凝固。

一些科學研究需要在低pH條件下培養微生物，包括耐低pH的微生物的分離和篩選、高酸度（低pH）條件下的抑菌效應研究、低pH條件的下微生物的生長特性研究等。已有的含瓊脂的低pH固體培養基的配制方法是將瓊脂和培養基中其它營養成份分別配制成瓊脂溶液和營養液，然后將營養液pH進行調整，兩者分別進行高壓滅菌，最后再將兩種溶液混合。這樣雖然可以避免瓊脂在滅菌時發生水解作用，但由于只對營養液pH進行了調整，混合后的溶液pH會發生變化，因而很難達到科學研究的要求。

有鑒于此，本發明提供了一種以瓊脂為凝固劑的低pH固體培養基的配制方法，為利用低pH固體培養基培養微生物奠定了基礎。

發明內容

一種以瓊脂為凝固劑的低pH固體培養基的配制方法，其特征是它包括以下步驟：

（1）無菌HCl溶液的制備

配置0.5~1.5M的HCl溶液，并用0.22μm微孔濾膜濾器過濾滅菌，得到無菌HCl溶液；

（2）培養基的配制

按照培養基配方稱量各物質，溶解、煮沸后混合均勻，然后定容、分裝；

（3）培養基的滅菌

將分裝好的培養基置于高壓蒸汽滅菌鍋內，在1.05kg/cm²、121℃下滅菌15～20min；

（4）pH的調節

滅菌后的培養基立即取出，在超凈工作臺中用無菌HCl溶液將培養基的pH調節為0.5～4.0；

（5）無菌檢查

將調節完pH的培養基倒平板，置于28℃恒溫培養箱中24h后進行無菌檢查。

本發明與現有技術相比具有以下優點：

（1）本發明配制的低pH固體培養基凝固性好。由于本方法經高壓蒸汽滅菌后再調節pH，瓊脂沒有經過高酸度溶液的影響，不容易被水解為低聚糖或還原糖，因而不會影響培養基的凝固性。

（2）本發明的操作方法簡單。調節酸度用的HCl溶液，只需配制后用微孔濾膜濾器過濾即可。

（3）本發明配制的低pH固體培養基，pH可低至0.5。而現有的通用固體培養基配置中，調節酸度的方法，pH低于4.5后則不能凝固。

（4）本發明配制的低pH固體培養基無微生物污染，可以滿足科學研究的需要。

具體實施方式

下面的實施例可以進一步說明本發明，但不以任何方式限制本發明。

實施例1