[發(fā)明專利]豬流行性腹瀉病毒S蛋白及其亞單位疫苗及其制備方法和應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810310540.8
• 申請日: 2018-04-03
• 公開（公告）號: CN108822191B
• 公開（公告）日: 2023-07-07
• 發(fā)明（設計）人: 錢泓;吳有強;卞廣林;張強;徐玉蘭;白志軍;吳素芳;車影;呂洋萍;查銀河
• 申請（專利權）人: 浙江海隆生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/17
• 分類號: C07K14/17;C12N15/50;C12N15/85;G01N33/68;G01N33/569;A61K39/215;A61P31/14;A61P1/12
• 代理公司: 北京乾誠五洲知識產(chǎn)權代理有限責任公司 11042
• 代理人: 付曉青;李廣文

1.一種豬流行性腹瀉病毒S蛋白，其特征在于，所述豬流行性腹瀉病毒S蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示，所述豬流行性腹瀉病毒S蛋白是由CHO細胞表達的含有高度糖基化的蛋白質(zhì)，所述糖基化的蛋白質(zhì)的分子量占所述豬流行性腹瀉病毒S蛋白的33.3％。

2.一種編碼如權利要求1所述的豬流行性腹瀉病毒S蛋白的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示。

3.一種豬流行性腹瀉病毒S蛋白亞單位的疫苗，其特征在于，所述疫苗包含如權利要求1所述的豬流行性腹瀉病毒S蛋白以及藥學上可接受的ISA201VG佐劑，其中，所述豬流行性腹瀉病毒S蛋白的濃度為30-200μg/頭份。

4.根據(jù)權利要求3所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗還含有免疫增強劑；所述免疫增強劑為Quil-A，所述Quil-A的濃度為300～500μg/頭份。

5.一種制備如權利要求3-4任一所述疫苗的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)克隆OPTI-S，該OPTI-S的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示，包括以下步驟：

1-1)對如SEQ?ID?NO.3所示的核苷酸序列的PEDV-S進行密碼子優(yōu)化，得到OPTI-S；和

1-2)將OPTI-S克隆到真核表達載體中，得到重組質(zhì)粒；

(2)所述豬流行性腹瀉病毒S蛋白的表達和純化；所述豬流行性腹瀉病毒S蛋白的表達和純化包括以下步驟：

2-1)將所述重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至CHO細胞株中；

2-2)通過培養(yǎng)、篩選、馴化步驟2-1)中所述CHO細胞株得到高度表達的細胞株；和

2-3)發(fā)酵培養(yǎng)步驟2-2)中所述細胞株，從細胞上清中純化得到重組豬流行性腹瀉病毒S蛋白；

(3)將步驟(2)中制備的重組豬流行性腹瀉病毒S蛋白制備成水相；

(4)將所述水相與作為油相的ISA201VG佐劑按照體積比46:54的比例乳化，得到疫苗。

6.根據(jù)權利要求5所述的方法，其特征在于，所述水相還包括免疫增強劑，所述免疫增強劑為Quil-A。

7.根據(jù)權利要求5所述的方法，其特征在于，所述真核表達載體為pEE12.4。

8.根據(jù)權利要求5所述的方法，其特征在于，所述CHO細胞為CHO-K1細胞。

9.一種根據(jù)權利要求1所述的重組豬流行性腹瀉病毒S蛋白在制備豬流行性腹瀉病毒S蛋白重組亞單位疫苗及相關診斷試劑中的應用。

10.一種根據(jù)權利要求3～4任一權利要求所述的豬流行性腹瀉病毒S蛋白重組亞單位疫苗在制備用于預防豬流行性腹瀉的藥物中的應用。