[發明專利]一種脂蛋白相關磷脂酶A2檢測試劑

在審

• 申請號: 201810310048.0
• 申請日: 2018-04-09
• 公開（公告）號: CN108562749A
• 公開（公告）日: 2018-09-21
• 發明（設計）人: 王賢理;池萬余;鄧慰
• 申請（專利權）人: 浙江伊利康生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種脂蛋白相關磷脂酶A2檢測試劑，包括R1試劑和R2試劑，所述R1試劑的組成成分為：4?羥乙基哌嗪乙磺酸（HEPES）100mmol/L、乙二胺四乙酸（EDTA）15mmol/L、3?[3?（膽酰胺丙基）二甲氨基]丙磺酸內鹽（CHAPS）10mmol/L、正壬烷磺酸鈉10mmol/L、氯化鈉100mmol/L、氯化鎂10mmol/L、防腐劑0.1％；所述R2試劑的組成成分為：檸檬酸18mmol/L、正壬烷磺酸鈉10mmol/L、乙醇或甘油20％、底物5mmol/L、防腐劑0.1％、穩定劑0.1％。本發明反應靈敏，受外界的影響較小，使用乙醇或甘油可以促進疏水性底物形成水相，使檢測更快速靈敏，檢測結果準確可靠，能真實反應血清中Lp?PLA2的生物活性，解決了現有檢測方法容易受到干擾而導致結果不準確，或無法反映脂蛋白相關磷脂酶A2的生物活性的技術問題。

技術領域

本發明涉及生物檢測技術領域，具體為一種脂蛋白相關磷脂酶A2檢測試劑。

背景技術

心血管疾病是危害人類健康的嚴重疾病，是造成死亡的主要原因之一。預防、檢測和治療心血管疾病一直是全世界醫學工作者努力不懈的目標。經研究發現，心腦血管疾病的病理基礎就是動脈粥樣硬化。

近來的研究也不斷證實：除血脂異常外，炎癥和氧化應激也是動脈粥樣硬化病理生理發生和發展的重要機制。而促成血管炎癥和氧化應激的就是脂蛋白相關磷脂酶A2（Lp-PLA2）。Lp-PLA2也稱血小板活化因子（PAF）乙酰水解酶，血液循環中的Lp-PLA2由血管內膜中的巨噬細胞、T細胞和肥大細胞分泌，大多以結合脂蛋白顆粒的形式存在，主要與低密度脂蛋白（LDL）結合，少量結合高密度脂蛋白和極低密度脂蛋白。Lp-PLA2通過水解動脈內膜上的LDL上的氧化卵磷脂，從而生成溶血卵磷脂和游離的氧化脂肪酸，后二者是促炎介質，能刺激粘附因子和細胞因子的產生，從而導致單核細胞由管腔向內膜聚集。單核細胞在內膜聚集后衍生為巨噬細胞，巨噬細胞吞噬oxLDL變成凋亡的泡沫細胞。而這些活化的巨噬細胞和泡沫細胞會產生更多的Lp-PLA2重返至循環中。凋亡的泡沫細胞聚集成動脈粥樣硬化性斑塊，斑塊能釋放細胞因子和蛋白酶，降解纖維帽的平滑肌細胞和膠原基質，使斑塊變得脆弱、破裂，導致血栓形成和心血管事件的發生。因此Lp-PLA2在血液中的濃度是判斷心腦血管疾病嚴重程度和預后的重要指標。

在檢測方法學方面，主要分活性的測定和質量的測定。前者相關的方法有滴定分析法，放射性核素法，分光光度計測量法和熒光計法。不過這些方法都用于實驗研究，并沒有標準化。后者是基于免疫反應的原理而測定LP-PLA2的質量，包括ELISA和免疫比濁法。早前，FDA批準了Lp-PLA2的ELISA測定法，用該方法評估動脈粥樣硬化相關的冠心病和缺血中風患者發生心血管事件的風險，但是近來由于其定量準確性差，操作時間長，自動化程度低，逐漸不被臨床醫生所接受；而免疫比濁法具有高特異性但無法區別失活的酶及代謝產物，從而無法反映具有生物活性的Lp-PLA2真實含量。因此研究出適用于全自動生化分析儀的準確測定Lp-LPA2的試劑將具有非常重要的意義。目前，研究人員更傾向于酶學生化測定的方法，該方法是基于Lp-PLA2酶活性催化底物而建立的，具有簡單方便，能即時反應血清中Lp-PLA2活性的優點。