[發明專利]一種呼吸道發熱病原體多聯熒光PCR檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201810305134.2
• 申請日: 2018-04-08
• 公開（公告）號: CN109055607A
• 公開（公告）日: 2018-12-21
• 發明（設計）人: 陳思
• 申請（專利權）人: 陳思
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/689;C12Q1/04;C12Q1/686;C12R1/35;C12R1/01
• 代理公司: 杭州君度專利代理事務所(特殊普通合伙) 33240
• 代理人: 王桂名

1.一種呼吸道發熱病原體多聯熒光PCR檢測試劑盒，包括PCR擴增試劑和對照試劑，其特征在于：所述的PCR擴增試劑由PCR反應緩沖液A、酶系B和各種病原體引物探針混合液構成，所述的對照試劑主要由陰性對照和陽性對照組成。

2.根據權利要求1所述的一種呼吸道發熱病原體多聯熒光PCR檢測試劑盒，其特征在于：所述的PCR反應緩沖液A的成分為5*Buffer，2.5mM dNTPs，所述的酶系B主要由HotStartHi Taq DNA聚合酶、M-MLV反轉錄酶和RNA酶抑制劑構成，所述的12種呼吸道發熱病原體檢測引物探針包含甲型流感病毒、甲型流感病毒H1N1、甲型流感病毒H3N2、甲型流感病毒H1N1(2009)、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、呼吸道腺病毒、肺炎支原體、肺炎衣原體、人副流感1型、人副流感2型和人副流感3型檢測引物探針。

3.根據權利要求1所述的一種呼吸道發熱病原體多聯熒光PCR檢測試劑盒，其特征在于：所述的5*Buffer的組分為50mM Tris-HCl、75mM KCl、17.5mM MgCl2。

4.根據權利要求1所述的一種呼吸道發熱病原體多聯熒光PCR檢測試劑盒，其特征在于：所述的12種呼吸道發熱病原體的探針和引物的具體序列和序號如下：

甲型流感病毒上游引物F：GATGAGCCTTCTAACCGAGG SEQ ID NO.1；

甲型流感病毒下游引物R：ATCTTCAAGTCTCTGCGCG SEQ ID NO.2；

甲型流感病毒探針P：5’-熒光報告基團-AGGCCCCCTCAAAGCCGAGAT-熒光淬基團-3’SEQID NO.3；

甲型流感病毒H1N1上游引物F：CACAATAGGAGAGTGTCCAAA SEQ ID NO.4；

甲型流感病毒H1N1下游引物R：GAAACCGGCAATGGCTCC SEQ ID NO.5；

甲型流感病毒H1N1探針P：5’-熒光報告基團-ACAGGACTAAGGAACACCCCATCCATTC-熒光淬基團-3’SEQ ID NO.6；

甲型流感病毒H3N2上游引物F：TGTTGAACGAAGCAAAGCCTAC SEQ ID NO.7；

甲型流感病毒H3N2下游引物R：CGGATGAGGCAACTAGTGACC SEQ ID NO.8；

甲型流感病毒H3N2探針P：5’-熒光報告基團-CTGTTACCCTTATGATGTGCCGGATTATGC-熒光淬基團-3’SEQ ID NO.9；

甲型流感病毒H1N1(2009)上游引物F：TTGAGCTCAGTGTCATCATTTGA SEQ ID NO.10；

甲型流感病毒H1N1(2009)下游引物R：GAGGACATGCTGCCGTTACA SEQ ID NO.11；

甲型流感病毒H1N1(2009)探針P：5’-熒光報告基團-CCTAGTTCAGACAATGGAACGTGTTACC-熒光淬基團-3’SEQ ID NO.12；

乙型流感病毒上游引物F：ACAGTGGAGGATGAAGAAGAT SEQ ID NO.13；

乙型流感病毒下游引物R：TCGAATTGGCTTTGRATGTCCT SEQ ID NO.14；

乙型流感病毒探針P：5’-熒光報告基團-CACTCTTCGAGCGTCTTAATGAAGGAC-熒光淬基團-3’SEQ ID NO.15；

呼吸道合胞病毒上游引物F：TTAGCAAAGTCAAGYTGAATGATACA SEQ ID NO.16；

呼吸道合胞病毒下游引物R：CATAATTAGGAGTGTCAATRCTGTCTC SEQ ID NO.17；呼吸道合胞病毒探針P：5’-熒光報告基團-CTRCTGTCATCCAGCAAATACACYATTCAACG-熒光淬基團-3’SEQID NO.18；

呼吸道腺病毒上游引物F：AGGATGCTTCGGAGTACCT SEQ ID NO.19；

呼吸道腺病毒下游引物R：TGTTCCCCAKACTGAAGTAGGTG SEQ ID NO.20；

呼吸道腺病毒探針P：5’-熒光報告基團-CCGGGTCTGGTGCAGTTYGCC-熒光淬基團-3’SEQID NO.21；

肺炎支原體上游引物F：GCCCTCCCGTTTGAAGCGTACT SEQ ID NO.22；

肺炎支原體下游引物R：ACCCTAAAGACACCTATACT SEQ ID NO.23；

肺炎支原體探針P：5’-熒光報告基團-CCATTGCCACCAAACACCAAAAGC-熒光淬基團-3’SEQID NO.24；

肺炎衣原體上游引物F：TCTCTGTAAACAAACCCAAGGGC SEQ ID NO.25；

肺炎衣原體下游引物R：AGACTTTGTTCCAGYAGCTGTTGCT SEQ ID NO.26；

肺炎衣原體基因探針P：5’-熒光報告基團-TCCCCTTGCCAACAGACGCTGGCG-熒光淬基團-3’SEQ ID NO.27；

人副流感1型上游引物F：AGTGCTCTGGAGGAAGAACTAGGTG SEQ ID NO.28；

人副流感1型下游引物R：CCCTATCAGCRGTGTCCTC SEQ ID NO.29；

人副流感1型探針P：5’-熒光報告基團-CCCACAGGTGGTGGAGCCATAGAAG-熒光淬基團-3’SEQ ID NO.30；

人副流感2型上游引物F：ATACAACAGGGCAATGGGCCASEQ ID NO.31；

人副流感2型下游引物R：GCGACCACCATATACAGGAAATAA SEQ ID NO.32；

人副流感2型探針P：5’-熒光報告基團-TCCTGCAGTTGGAAGCGGGATCTATCACC-熒光淬基團-3’SEQ ID NO.33；

人副流感3型上游引物F：TTCATCTGTATCCTCAGAGATCCC SEQ ID NO.34；

人副流感3型下游引物R：CCACTCCCATTGCATAACTCC SEQ ID NO.35；

人副流感3型探針P：5’-熒光報告基團-ATAGTTGCCTGGTGCGAACTCACCA-熒光淬基團-3’SEQ ID NO.36；

作為優選，所述的熒光報告基團選自FAM、HEX、ROX、CY3、CY5熒光報告基團，所述的淬滅基團選自BHQ1、BHQ2、TAMRA熒光淬滅基團。