[發明專利]一種16種食源性致病菌檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201810304600.5
• 申請日: 2018-04-08
• 公開（公告）號: CN108220464A
• 公開（公告）日: 2018-06-29
• 發明（設計）人: 陳思
• 申請（專利權）人: 陳思
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/14;C12Q1/10;C12Q1/04;C12R1/42;C12R1/01;C12R1/19;C12R1/085;C12R1/63
• 代理公司: 杭州君度專利代理事務所(特殊普通合伙) 33240
• 代理人: 王桂名

本發明公開了一種16種食源性致病菌檢測試劑盒，包括PCR擴增試劑和對照試劑，所述的PCR擴增試劑由PCR反應緩沖液A、酶系B和16種食源性致病菌的引物探針混合液構成，所述的對照試劑主要由陰性對照和陽性對照組成，所述的PCR反應緩沖液A的成分為5*Buffer，25mM dN(U)TPs，所述的酶系B主要由HotStart Hi Taq DNA聚合酶、UNG防污染酶構成，所述的16種食源性致病菌檢測引物探針包含含沙門氏菌、志賀氏菌、腸致病性大腸桿菌、產毒素大腸桿菌、侵襲性大腸桿菌、黏附性大腸桿菌、大腸桿菌O157、金黃色葡萄球菌、單增李斯特菌、蠟樣芽孢菌、空腸彎曲菌、副溶血弧菌、霍亂弧菌O1群、霍亂弧菌O139群、小腸結腸炎耶爾森菌和阪崎腸桿菌檢測引物探針混合液。本發明具有檢測靈敏度高、簡便快捷等優點。

技術領域

本發明涉及生物技術和致病菌檢測領域，具體來說是一種16種食源性致病菌檢測試劑盒。

背景技術

民以食為天，食以安為先。但近年來，食品安全件事頻發，對人們的健康構成了較大的威脅。食品微生物污染問題日漸突出，已成為全球范圍內重要的公共衛生問題。根據美國農業部經濟研究局的統計結果顯示,沙門氏菌、致病性大腸桿菌(EPEC、ETEC、EIEC、EAEC、EHEC)、彎曲桿菌、副溶血性弧菌、葡萄球菌及毒素、致病性蠟樣芽胞桿菌、變形桿菌屬、李斯特菌、志賀氏菌等幾類重要的細菌會造成巨大的經濟損失。

沙門氏菌(Salmonella)為腸桿菌科中重要的一類革蘭氏陰性菌，極易污染食品、水源及畜產品，是畜禽肉胴體、畜禽產品污染的重要來源，并可通過各種途經傳染給人，引起人食物中毒、急性腸胃炎和動物腹瀉等疾病。我國細菌性食物中毒70％～80％是由沙門氏菌引起。

志賀氏菌(Shigella spp.)通稱痢疾桿菌，是一類具有高度傳染性的腸道致病菌。主要通過消化道途徑傳播，侵襲腸上皮細胞，引起以發熱、腹痛、腹瀉為特征的典型的痢疾癥狀，嚴重危害人類健康。根據WHO統計，每年有1.647億人感染痢疾，約有110萬死亡，其中多數為5歲以下的兒童。在成年患者中，10～100CFU志賀氏菌就可通過感染腸道致病，引發嚴重的炎癥反應。在我國感染性腹瀉病原菌中高居首位經常有由于水源或食品受到志賀菌污染而引起痢疾、腹瀉等疾病流行的報道。

引起腹瀉的大腸桿菌稱為致瀉性大腸桿菌，根據毒力因子、致病機理和流行病學特征，通常將致瀉性大腸桿菌分為5類，分別為腸致病性大腸桿菌(EPEC)、腸產毒性大腸桿菌(ETEC)、腸侵襲性大腸桿菌(EIEC)、腸黏附性大腸桿菌(EAEC)以及腸出血性大腸桿菌(EHEC)。腸侵襲性大腸桿菌(EIEC)的多數菌株無動力，生化反應和抗原結構均近似痢疾桿菌，應予注意。

金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)為革蘭氏陽性菌，是引起細菌性食物中毒的重要病原菌之一。其產生的金黃色葡萄球菌腸毒素在食物中毒事件中占50％，居于整個細菌性食物中毒首位。金黃色葡萄球菌腸毒素按照血清型可以分為14型(A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、K、L、M、N、O)。爆發性食物中毒最常見的血清型為A型和D型。

單核細胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes)單增李斯特菌為革蘭陽性短小桿菌，無芽孢，不分支，形狀規則。主要以食物為傳染媒介，是重要的食源性人獸共患病原菌，WHO將其列為20世紀90年代食品中四大致病菌之一。該菌在自然界中分布廣泛，極易污染食品而引起食物中毒和李氏桿菌病的暴發。