[發明專利]一種蝦原肌球蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞及其應用

有效

• 申請號: 201810302087.6
• 申請日: 2018-04-04
• 公開（公告）號: CN108359642B
• 公開（公告）日: 2020-09-04
• 發明（設計）人: 匡華;曾露;胥傳來;徐麗廣;劉麗強;宋珊珊;吳曉玲;胡擁明
• 申請（專利權）人: 江南大學;無錫迪騰敏生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C12N15/06;C07K16/18;G01N33/68;G01N33/577
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 張勇

本發明公開了一種蝦原肌球蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞及其應用，屬于食品安全免疫檢測領域。本發明的一株蝦原肌球蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞株FB12?1已于2017年9月5日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC No.14690，保藏地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所。以細胞株FB12?1分泌的抗體7H6為包被抗體，抗體7H6標記HRP后為酶標抗體(7H6?HRP)，以蝦原肌球蛋白為標準品建立了檢測蝦原肌球蛋白的雙抗體夾心酶聯免疫檢測方法，在檢測食品過敏原中的應用，具有實際應用價值。

技術領域

本發明涉及一種蝦原肌球蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞及其應用，屬于食品安全免疫檢測技術領域。

背景技術

近年來,食物過敏已成為一個公眾性的食品安全問題。食物過敏是人類常見的一種免疫性疾病，主要是由食物中蛋白質引起，由IgE介導的Ⅰ型超敏反應，其臨床癥狀主要有水腫、皮炎、哮喘以及腸道綜合癥等，嚴重時會引發休克甚至危及生命，復雜食物樣品中微量過敏原的檢測和定量成為當務之急。甲殼類動物是聯合國糧農組織提出的8大類易過敏食物之一，甲殼類動物主要過敏原為分子質量約為36-38kDa的蝦原肌球蛋白。目前體外針對微量過敏原的檢測方法有免疫學方法、蛋白組學法、PCR法、化學發光免疫方法。雖然目前有關過敏原檢測的方法很多,但都存在各自不同的問題,如檢測速度慢、成本高、檢測需要特定的分析儀器等,制約了食品中過敏原檢測方法的發展。因此實現準確、安全、經濟、快速、高通量、高靈敏的體外檢測技術方法具有現實意義。

與其他過敏原檢測方法相比，酶聯免疫法(ELISA)是一種極為高效、敏感、快速的檢測方法，檢測時對樣本的純度要求不高而且操作簡便，適用于大量樣本的現場快速檢測。建立高效的免疫學檢測方法，篩選高特異性的單克隆單體是重要前提。

發明內容

本發明的目的是提供蝦原肌球蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞株及其應用，建立檢測蝦原肌球蛋白的雙抗體夾心ELISA法。

本發明的第一個目的是提供一種蝦原肌球蛋白單克隆細胞株，已于2017年9月5日保藏 于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，分類命名為單克隆細胞株，保藏編號為 CGMCC No.14690，保藏地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究 所。

本發明的第二個目的是提供一種蝦原肌球蛋白單克隆抗體，由保藏編號為CGMCCNo.14690的單克隆細胞株分泌產生。

本發明的第三個目的是提供蝦原肌球蛋白單克隆抗體的應用。

在本發明的一種實施方式中，所述應用是用于食品中蝦原肌球蛋白的分析檢測。

在本發明的一種實施方式中，所述應用是用于制備ELISA競爭法檢測蝦原肌球蛋白的試劑。

在本發明的一種實施方式中，所述應用是以所述的蝦原肌球蛋白單克隆抗體為包被抗體，抗體標記HRP后為酶標抗體，建立檢測蝦原肌球蛋白的雙抗體夾心ELISA法，用此建立的雙抗夾心法檢測食品中蝦原肌球蛋白，檢測限為0.9ng/ml，具有實際應用價值。

本發明的第四個目的是提供制備所述蝦原肌球蛋白單克隆細胞株的方法，是用蝦原肌球蛋白免疫動物，從動物體內分離多克隆抗體。

在本發明的一種實施方式中，所述蝦原肌球蛋白雜交瘤細胞株的制備方法基本步驟為：

(1)蝦原肌球蛋白過敏原的制備：制備蝦蛋白浸提液、飽和硫酸銨分級沉淀、SDS-PAGE 鑒定蝦原肌球蛋白、凝膠過濾層析分離得到高純度蛋白。