[發明專利]一種抗氯丙那林單克隆抗體雜交瘤細胞株及其應用

在審

• 申請號: 201810302086.1
• 申請日: 2018-04-04
• 公開（公告）號: CN108517317A
• 公開（公告）日: 2018-09-11
• 發明（設計）人: 匡華;蔣薇;胥傳來;徐麗廣;馬偉;劉麗強;吳曉玲;宋珊珊;胡擁明
• 申請（專利權）人: 江南大學;無錫迪騰敏生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/44;G01N33/577;G01N33/558;C07C229/34;C07C227/08;C07C227/16;C07C227/18;C07C67/08;C07C69/612;C07C67/343;C07C67/307;C07C69/
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• 代理人: 張勇

本發明公開了一種抗氯丙那林單克隆抗體雜交瘤細胞株及其應用，屬于食品安全免疫檢測領域。本發明的方法是：氯丙那林完全抗原與等量弗氏佐劑混合乳化后，通過背部皮下注射免疫BALB/c小鼠。第一次免疫用完全弗氏佐劑，之后都用不完全弗氏佐劑。將高效價低IC50的小鼠的脾細胞通過PEG方法與小鼠骨髓瘤細胞融合，經過間接競爭ELISA篩選和三次亞克隆，得到一株雜交瘤細胞株。此細胞株分泌的單克隆抗體，對氯丙那林具有較好的特異性和檢測靈敏度，IC₅₀值為0.435ng/ml，可以用于食品中氯丙那林的殘留檢測。

技術領域

本發明涉及一種抗氯丙那林單克隆抗體雜交瘤細胞株及其應用，屬于食品安全免疫學檢測領域。

背景技術

β₂-受體激動劑(β₂-agonist)能明顯促進動物體內蛋白質的合成和脂肪的分解，所以常被當作動物飼料添加劑使用來達到提高飼養動物瘦肉率的目的。但β₂-受體激動劑在動物體內代謝緩慢且具有蓄積毒性，動物可食性部分通過食物鏈進入人體，進而對人類的健康帶來危害。氯丙那林的化學名為1-(2-氯苯基)-2-異丙基氨基-乙醇，也是一種β₂-受體激動劑，在臨床上常用來治療哮喘類病癥。但是當達到一定劑量，它和其它β₂-受體激動劑一樣在動物體內具有營養再分配作用，可能會被用作一種新型的動物促生長劑。因為公眾關注少，所以在例行檢測中常被忽略，給動物性食品安全帶來潛在的威脅。早在2007年，通過液質聯用儀發現了食用畜產品中氯丙那林的殘留，并提出“新型瘦肉精”的概念。另外，2013年我國破獲的首例獸藥非法添加“瘦肉精”案件中，罪魁禍首也是鹽酸氯丙那林，它被添加在“30％替米考星注射液”等6種治療動物感冒的獸藥中，造成氯丙那林在動物體內殘留。

目前檢測氯丙那林的方法主要是液相色譜法(HPLC)，液相色譜串聯質譜法(LC-MS/MS)，酶聯免疫吸附法，免疫親和色譜柱和電化學傳感器等方法，但是這些方法存在操作繁瑣，耗時，費用比較貴等缺點，不能實現大量樣品的快速檢測，因此建立一種快速簡便的檢測方法具有重要意義。酶聯免疫法(ELISA)是一種極為高效、敏感、快速的檢測方法，檢測時對樣本的純度要求不高而且操作簡便，適用于大量樣本的現場快速檢測。然而得到高特異性和高特異性的單克隆單體是免疫學檢測的前提，其中人工抗原的合成是其中重要的一步。

發明內容

本發明的第一個目的在于提供一種抗氯丙那林單克隆抗體雜交瘤細胞株，分類命名為單克隆細胞株，已于2017年9 月5日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC No.14689，保藏地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號。

本發明的第二個目的是提供由雜交瘤細胞CGMCC No.14689分泌的單克隆抗體。

本發明的第三個目的是提供所述單克隆抗體的應用。

在本發明的一種實施方式中，所述應用是用于制備檢測氯丙那林的試劑盒。

本發明的第四個目的是提供一種氯丙那林檢測試劑盒，所述試劑盒含有所述單克隆抗體，包被于固相載體上的抗原，能與檢測抗原結合的酶標抗體，顯色底物，洗滌液和封閉液；所述抗原為氯丙那林包被原，所述抗體為雜交瘤細胞CGMCC No.14689分泌的單克隆抗體。

本發明的第五個目的是提供一種氯丙那林的檢測方法，所述方法包括：含有包被抗原的固相載體的制備，孵育和檢測；所述含有包被抗原的固相載體的制備是合成的氯丙那林包被原包被至固相載體上；孵育是將所述單克隆抗體與待測樣品充分結合，再加入酶標抗體；所述檢測是加入顯色底物，檢測OD₄₅₀下的吸光值。

本發明的第六個目的是提供所述單克隆抗體雜交瘤細胞的制備方法，所述方法包括(1) 半抗原合成、免疫原合成、小鼠免疫、細胞融合和陽性克隆的篩選及鑒定。