[發(fā)明專利]一種檢測IBRV和BVDV的引物、探針及方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810301912.0
• 申請日: 2018-04-04
• 公開（公告）號: CN110157836A
• 公開（公告）日: 2019-08-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 謝芝勛;謝志勤;范晴;張民秀;黃嬌玲;張艷芳;曾婷婷;謝麗基
• 申請（專利權(quán)）人: 廣西壯族自治區(qū)獸醫(yī)研究所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12N15/11
• 代理公司: 北京華仲龍騰專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11548
• 代理人: 黃玉玨

本發(fā)明提供了一種檢測IBRV和BVDV的引物、探針及方法。本發(fā)明提供的引物和/或探針組合物包括序列表中SEQ ID№：1‐SEQ ID№：6所示至少一種核苷酸序列。本發(fā)明利用本發(fā)明提供的引物和/或探針組合物，通過包括Taqman二重?zé)晒舛縋CR反應(yīng)的PCR反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)了牛傳染性鼻氣管炎病毒(IBRV)和牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)的同時(shí)檢測。本發(fā)明提供的引物和/或探針組合物及檢測方法，靈敏度高，每個(gè)反應(yīng)最低能檢測到100個(gè)混合模板拷貝，特異性高、重復(fù)性好、干擾性小、臨床檢測效果好，可以快速、準(zhǔn)確、敏感地檢測鑒別區(qū)分IBRV和BVDV，為臨床鑒別診斷IBRV和BVDV感染牛提供了一種更好的方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于病毒檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測牛傳染性鼻氣管炎病毒(IBRV)和牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)的引物、探針及方法

背景技術(shù)

傳染性牛鼻氣管炎病毒(Infectious bovine rhino-tracheitis virus，IBRV)和牛病毒性腹瀉病毒(bovine viral diarrheamucosal disease virus，BVDV)是危害養(yǎng)牛業(yè)的兩種常見病毒，傳染性牛鼻氣管炎病毒感染可引起上牛呼吸道及氣管黏膜發(fā)炎、呼吸困難、流鼻涕等癥狀，發(fā)生急性、熱性、接觸性傳染病等，包括引起牛的炎癥如結(jié)膜炎、幼牛腦膜炎、膿胞性外陰炎、陰道炎、龜頭炎、乳腺炎、子宮炎等，嚴(yán)重的引起牛流產(chǎn)。我國首次發(fā)現(xiàn)并報(bào)道有此病毒是在1980年，目前呈世界性流行，由該病而導(dǎo)致的經(jīng)濟(jì)損失相當(dāng)大。牛病毒性腹瀉病毒常見可引起牛腹瀉，并且病毒可通過牛的血液和牛的排泄物等多種途徑進(jìn)行傳播。據(jù)報(bào)道一些BVDV毒株(1a和1b,生物非細(xì)胞致病基因)常常與呼吸道性疾病發(fā)生有關(guān)，且在牛肺中已分離到該病毒，2型的病毒會導(dǎo)致犢牛出現(xiàn)嚴(yán)重的間質(zhì)性肺炎，血小板減少，骨髓壞死和腹瀉，且持續(xù)感染BVDV的犢牛或母牛一旦發(fā)病會迅速形成細(xì)菌性肺炎。該病毒引起牛發(fā)病率高，但死亡率低，病牛是該病毒的攜帶者，可終身帶毒和排毒，給養(yǎng)牛業(yè)帶來極大的危害。

近年來，隨著規(guī)模化牛養(yǎng)殖，臨床上出現(xiàn)越來越多的兩種病原混合感染牛的病例，給診斷帶來一定的困難，這兩種病的共同特征是引起牛的黏膜發(fā)炎及流產(chǎn)，根據(jù)臨床癥狀很難作出正確的判斷，必須通過實(shí)驗(yàn)室方法進(jìn)行檢測區(qū)分。目前診斷這兩種病原的方法主要有病毒分離鑒定、PCR方法、單重?zé)晒釶CR方法、ELISA方法等，但是已建立的這些方法或多或少不能滿足臨床快速、準(zhǔn)確鑒別診斷的需要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種檢測牛傳染性鼻氣管炎病毒(IBRV)和牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)的引物、探針，并建立了一種同時(shí)檢測鑒別IBRV和BVDV的Taqman二重?zé)晒舛縋CR方法，能滿足臨床上快速、準(zhǔn)確檢測診斷這兩種病毒。

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種引物和/或探針組合物，所述組合物包括下述1)‐6)中的至少一種：

1)序列表中SEQ ID №：1所示核苷酸序列；或?qū)⑿蛄斜碇蠸EQ ID №：1所示核苷酸序列經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列表中SEQ ID №：1所示核苷酸序列具有相同功能的核苷酸序列；

2)序列表中SEQ ID №：2所示核苷酸序列；或?qū)⑿蛄斜碇蠸EQ ID №：2所示核苷酸序列經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列表中SEQ ID №：2所示核苷酸序列具有相同功能的核苷酸序列；

3)序列表中SEQ ID №：3所示核苷酸序列；或?qū)⑿蛄斜碇蠸EQ ID №：3所示核苷酸序列經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列表中SEQ ID №：3所示核苷酸序列具有相同功能的核苷酸序列；

4)序列表中SEQ ID №：4所示核苷酸序列；或?qū)⑿蛄斜碇蠸EQ ID №：4所示核苷酸序列經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列表中SEQ ID №：4所示核苷酸序列具有相同功能的核苷酸序列；