[發(fā)明專利]用于檢測肥胖風(fēng)險位點的核酸序列、試劑盒及其檢測方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201810301773.1
• 申請日: 2018-04-04
• 公開（公告）號: CN108359729A
• 公開（公告）日: 2018-08-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 周艷琳
• 申請（專利權(quán)）人: 良培基因生物科技（武漢）有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 上海精晟知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31253
• 代理人: 馮子玲

本發(fā)明公開了一種用于檢測肥胖風(fēng)險位點的核酸序列、試劑盒及其檢測方法。本發(fā)明的核酸序列組合是針對肥胖5個多態(tài)性位點(rs9939609，rs1558902，rs571312，rs17782313和rs9356744)提出的，包括每個位點野生型的上游引物、突變型的上游引物和通用下游引物，應(yīng)用該核酸序列組合制備的快速檢測肥胖風(fēng)險位點的試劑盒，使用方便，操作簡便，自動化程度高，減少了操作過程的污染，檢測效果好，具有高靈敏度，高特異性，高準(zhǔn)確度，高精確度的特點。本發(fā)明的檢測方法采用完全閉管操作，方便快捷、通過直接探索PCR過程中熒光信號值的獲得檢測結(jié)果，不需要PCR后處理或電泳檢測，克服了常規(guī)PCR技術(shù)的易污染、出現(xiàn)假陽性的技術(shù)問題，能有效避免出現(xiàn)非特異性擴增，適合大批量樣本檢測。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種用于檢測肥胖風(fēng)險位點的核酸序列、試劑盒及其檢測方法。

背景技術(shù)

肥胖是一種與遺傳因素及生活方式密切相關(guān)的慢性疾病，不同個體由于遺傳體質(zhì)及生活環(huán)境各異，導(dǎo)致其肥胖的高危因子不同，并且進(jìn)行體重控制的有效形式也存在差異。因此，了解自身遺傳狀況，不僅可以通過飲食結(jié)構(gòu)和生活方式的調(diào)整避免肥胖和超重的發(fā)生。

體脂量和肥胖癥相關(guān)基因(FTO)位于染色體16q12，編碼一種去甲基化酶，有研究表明，F(xiàn)TO的不同基因型與肥胖癥的發(fā)病率緊密相關(guān)，F(xiàn)TO rs9939609AT和AA基因型的人比rs9939609TT基因型的人具有顯著地肥胖癥發(fā)病風(fēng)險，攜帶FTO基因rs9939609位點風(fēng)險等位基因使BMI增高0.26kg/m²。對于FTO基因上的另一個多態(tài)性位點rs1558902，在青少年研究中發(fā)現(xiàn)攜帶TA/AA基因型者超重肥胖發(fā)生風(fēng)險是攜帶CC基因型者的1.65倍。

黑素皮質(zhì)素受體-4(MC4R)是下丘腦腹內(nèi)側(cè)核分泌的一類肽類物質(zhì)，為黑素皮質(zhì)素受體家族5個亞型之一。MC4R具有介導(dǎo)瘦素蛋白的功能，是一個調(diào)節(jié)能量平衡與能量動態(tài)平衡的重要信號分子，從而在控制食欲和體重穩(wěn)態(tài)中起關(guān)鍵作用。根據(jù)GWAS數(shù)據(jù)庫分析，MC4R(rs17782313)多態(tài)性與肥胖密切相關(guān)，參與控制食欲和增加能量消耗，進(jìn)而調(diào)節(jié)體重。rs571312位點位于MC4R基因旁邊，有報道發(fā)現(xiàn)rs571312多態(tài)性與青少年肥胖或代謝異常肥胖具有相關(guān)性。

CDK5調(diào)節(jié)亞單位相關(guān)蛋白1類似物1(CDKAL1)在保護(hù)β細(xì)胞功能、降低血糖方面發(fā)揮重要的作用。研究發(fā)現(xiàn)CDKAL1rs9356744位點多態(tài)性雖然在歐洲人中相關(guān)性不大，但在東亞人群中與BMI強相關(guān)。因此檢測rs9356744對預(yù)測肥胖風(fēng)險有重要作用。

目前，檢測基因多態(tài)性和基因突變的方法主要有sanger測序法、基因芯片雜交法、PCR-RFLP法和熒光定量PCR法。Sanger測序法是突變分析的金標(biāo)準(zhǔn)，能發(fā)現(xiàn)已知和未知突變位點，但儀器昂貴，靈敏度低，操作復(fù)雜，周期長，容易污染；普通PCR-RFLP方法技術(shù)簡便，價格便宜，適宜少量樣本的實驗室檢測，但僅能檢測有酶切位點的突變，無酶切位點不能檢測，存在由PCR產(chǎn)物污染導(dǎo)致假陽性的風(fēng)險；基因芯片技術(shù)具有高通量，微型化，自動化等特點，適用于全基因組突變掃描，不適宜單個基因的突變位點檢測，且精度低，價格昂貴，這些缺點限制了這三種方法在實際臨床工作中的發(fā)展和應(yīng)用，無法滿足快速指導(dǎo)臨床評估要求。因此，一種快速、準(zhǔn)確且低成本的新型檢測方法成為了臨床檢查的迫切需求。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，本發(fā)明提出一種用于檢測肥胖風(fēng)險位點的核酸序列、試劑盒及其檢測方法。為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的：

本發(fā)明首先提出一種用于檢測肥胖風(fēng)險位點的核酸序列組合，所述的核酸序列組合包括：

1)如SEQ ID NO：1所示核苷酸序列的FTO基因rs9939609位點野生型上游引物、如SEQ ID NO：2所示核苷酸序列的FTO基因rs9939609位點突變型上游引物和如SEQ ID NO：3所示核苷酸序列的二者的通用下游引物；