[發明專利]一種產物特異性提高的環糊精葡萄糖基轉移酶及制備方法

有效

• 申請號: 201810299543.6
• 申請日: 2018-04-04
• 公開（公告）號: CN108531466B
• 公開（公告）日: 2020-08-04
• 發明（設計）人: 韓瑞枝;倪曄;葛彬彬;姚棟;董晉軍;許國超
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C12N15/54;C12N15/70;C12N1/21;C12P19/60;C12P19/18
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 張勇

1.一種環糊精糖基轉移酶突變體，其特征在于，所述突變體與GenBank JX412224公布的環糊精糖基轉移酶相比，第156位丙氨酸分別突變成賴氨酸或纈氨酸。

2.編碼權利要求1所述突變體的核苷酸片段。

3.含有編碼權利要求1所述突變體的基因的載體。

4.表達權利要求1所述突變體的基因工程菌。

5.一種構建權利要求4所述基因工程菌方法，其特征在于，所述方法的具體步驟如下：

1）采用化學全合成或PCR方法克隆編碼所述環糊精葡萄糖基轉移酶基因；

2）將步驟1）獲得的環糊精葡萄糖基轉移酶基因連接到大腸桿菌表達載體，得到重組表達載體；

3）將步驟2）獲得的重組表達載體轉化大腸桿菌BL21得到基因工程菌。

6.一種生產環糊精葡萄糖基轉移酶的方法，其特征在于，所述方法具體為：

以權利要求5所述的基因工程菌為生產菌株，活化后按2-4%接種量將種子液接至含75-100 μg/mL 氨芐青霉素的TB液體培養基；大腸桿菌在30~37℃振蕩培養至OD₆₀₀=0.6~0.8，加入0.01-0.02 mM終濃度的IPTG誘導胞外表達，并在23-25℃繼續振蕩培養一定時間85~95 h后，將發酵液于4-6℃、8000-10000 rpm離心15-20 min除菌體，收集富含環糊精葡萄糖基轉移酶的上清液；經硫酸銨鹽析，透析，以及鎳柱親和層析，獲得較純的環糊精葡萄糖基轉移酶并凍干備用。

7.權利要求1所述突變體在染料木素的糖基化方面的應用。

8.權利要求1所述突變體在食品、化工或紡織領域的應用。