[發(fā)明專利]一種心腦雙靶向脂質(zhì)體及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810299429.3
• 申請日: 2018-04-04
• 公開（公告）號: CN108653743B
• 公開（公告）日: 2020-06-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊寶峰;彭海生;劉肖瑩;李明慧;廉明明;唐淑坤;劉云翠;柴彥群
• 申請（專利權(quán)）人: 哈爾濱醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號: A61K47/54
• 分類號: A61K47/54;A61K47/68;A61K47/60;A61K47/69;A61K33/36;A61P9/00;A61P9/10;A61P25/00;A61P35/00;C08G65/332;C08G65/335
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;馬鑫

1.一種心腦雙靶向脂質(zhì)體，其特征在于，所述的心腦雙靶向脂質(zhì)體是通過在式I所示的乙酰化糖酯-聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺共軛物修飾的脂質(zhì)體的表面偶聯(lián)Anti-cTnI蛋白抗體或其片段后得到的；

其中，n＝10～120。

2.如權(quán)利要求1所述的心腦雙靶向脂質(zhì)體，其特征在于，n＝13～45。

3.如權(quán)利要求1所述的心腦雙靶向脂質(zhì)體，其特征在于，所述的聚乙二醇為聚乙二醇600、聚乙二醇1000或聚乙二醇2000。

4.如權(quán)利要求1所述的心腦雙靶向脂質(zhì)體，其特征在于，式I所示的乙酰化糖酯-聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺共軛物通過以下步驟制備得到：在二氯甲烷中將p-(戊二酸酰氨)苯基-α-D-乙酰甘露糖(Ac₄MAN-COOH)和聚乙二醇(PEG)通過縮合反應(yīng)形成PEG-Ac₄MAN，然后將二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(DSPE)與PEG-Ac₄MAN進(jìn)行偶聯(lián)，得到DSPE-PEG-Ac₄MAN，即為式I所示的化合物。

5.如權(quán)利要求4所述的心腦雙靶向脂質(zhì)體，其特征在于，式I所示的乙酰化糖酯-聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺共軛物通過以下步驟制備得到：將疊氮-聚乙二醇-戊二酸酰氨溶于四氫呋喃中，之后加入Pd/c和乙酸，于室溫下通入氫氣，反應(yīng)一夜；將粗品過濾后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干燥，然后溶于二氯甲烷中，加入三乙胺和p-(戊二酸酰氨)苯基-α-D-乙酰甘露糖(Ac₄MAN-COOH)，在室溫下反應(yīng)一夜，分離純化，得到PEG-Ac₄MAN；將PEG-Ac₄MAN溶于二氯甲烷中，依次加入N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(EDCI)，室溫反應(yīng)過夜，分離純化，得到丁二酰亞胺聚乙二醇乙酰甘露糖苷；將丁二酰亞胺聚乙二醇乙酰甘露糖苷溶于二氯甲烷中，加入TEA和溶于氯仿中的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(DSPE)，在室溫下反應(yīng)一夜，用飽和NaCl萃取2次，分離純化，得到DSPE-PEG-Ac₄MAN，即為式I所示的化合物。

6.一種制備權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的心腦雙靶向脂質(zhì)體的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)乙酰化糖酯-聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺共軛物修飾的脂質(zhì)體的制備

將蛋黃磷脂酰膽堿(EPC)、膽固醇(CHO)和式I所示的乙酰化糖酯-聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺共軛物用無水乙醇溶解在旋轉(zhuǎn)瓶中，通過在減壓條件下蒸發(fā)該混合物形成薄的脂質(zhì)膜；用生理鹽水溶液水化該脂質(zhì)膜；通過超聲處理使脂質(zhì)體溶液分散，并通過聚碳酸酯膜擠出，得到乙酰化糖酯-聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺共軛物修飾的脂質(zhì)體，命名為Ac₄MAN-PEG-LIP，將脂質(zhì)體樣品保存在4℃，備用；

(2)Anti-cTnI抗體修飾的脂質(zhì)體制備

合成Anti-cTnIAb-DSPE-PEG溶液：將Anti-cTnI抗體和DSPE-PEG-馬來酰亞胺分別溶于HEPES溶液中，然后混合，在4℃下過夜，得到Anti-cTnI Ab-DSPE-PEG溶液，將Anti-cTnIAb-DSPE-PEG溶液與步驟(1)制備的Ac₄MAN-PEG-LIP脂質(zhì)體溶液在37℃溫育2小時，制備得到Anti-cTnI抗體修飾的Ac₄MAN-PEG-LIP，命名為Anti-cTnI-PEG/Ac₄MAN-PEG-LIP，即為心腦雙靶向脂質(zhì)體。

7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，步驟(1)中EPC，CHO和式I所示的乙酰化糖酯-聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺共軛物的摩爾比為(40-49)：(50-55)：(1-5)。

8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，步驟(1)中EPC，CHO和式I所示的乙酰化糖酯-聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺共軛物的摩爾比為49：50：1。