[發明專利]用于檢測糖尿病風險位點的核酸序列、試劑盒及其檢測方法

在審

• 申請號: 201810298890.7
• 申請日: 2018-04-04
• 公開（公告）號: CN108359728A
• 公開（公告）日: 2018-08-03
• 發明（設計）人: 周艷琳
• 申請（專利權）人: 良培基因生物科技（武漢）有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 馮子玲

本發明公開了一種用于檢測糖尿病風險位點的核酸序列、試劑盒及其檢測方法。本發明的核酸序列組合是針對糖尿病5個多態性位點(rs228648，rs114202595，rs7754840，rs7756992和rs7574865)提出的，包括每個位點野生型的上游引物、突變型的上游引物和通用下游引物，應用該核酸序列組合制備的快速檢測糖尿病風險位點的試劑盒，使用方便，操作簡便，自動化程度高，減少了在操作過程的污染，檢測效果好，具有高靈敏度，高特異性，高準確度，高精確度的特點。本發明的檢測方法采用完全閉管操作，方便快捷、通過直接探索PCR過程中熒光信號值的獲得檢測的結果，不需要PCR后處理或電泳檢測，克服了常規PCR技術的易污染、出現假陽性的技術問題，能有效避免出現非特異性擴增，適合大批量樣本檢測。

技術領域

本發明涉及醫學和生物技術領域，尤其涉及一種用于檢測糖尿病風險位點的核酸序列、試劑盒及其檢測方法。

背景技術

糖尿病是一種由遺傳因素及環境因素共同參與相互作用的多基因病，1型或2型糖尿病均存在明顯的遺傳異質性。1型糖尿病(T1DM)是一種免疫調節性疾病，是由免疫失調產生炎癥細胞因子，誘發胰島產生炎癥引起的。2型糖尿病(T2DM)是由于胰島素抵抗和β細胞分泌缺陷導致高血糖的一種復雜多基因疾病，糖尿病患者中90％以上為2型糖尿病。

UST2(rs228648)與G蛋白偶聯受體GPR14結合后影響細胞內Ca²⁺內流，進而影響胰島素分泌障礙，故T2DM患者的血清UTS2顯著高于正常人，另一方面UTS2還可抑制胰島素的釋放，使人群的胰島素抵抗程度加深，UST2rs228648位點多態性使UTS2濃度變化，引起胰島素抵抗，在T2DM的發生中起重要作用。

轉錄因子配對盒4(PAX4)主要功能為胰腺發育的轉錄抑制因子，在胰腺B細胞的分化和發育過程中發揮重要作用，PAX4基因敲除小鼠胰腺成熟的胰島素分泌細胞和生長抑制分泌細胞完全增生，而分泌胰高血糖素的B細胞增生。日本人研究結果提示rs114202595多態性與日本人群T2DM相關，且對胰島B細胞的功能有影響。另一報道顯示，攜帶rs114202595AA型的T2DM患者缺乏胰島素分泌第一時相，可見PAX4作為T2DM的發病發展中的重要基因，其突變可對T2DM的發病產生影響。

CDK5調節亞單位相關蛋白1類似物1(CDKAL1)在保護β細胞功能、降低血糖方面發揮重要的作用，若CDKAL1基因發生變異，則對CDK5失去抑制作用，影響胰島β細胞的分泌功能，使胰島素的分泌減少，導致T2DM的發生。據研究表明，rs7756992位點和rs7754840位點多態性在許多東亞人群中與T2DM的發病顯著相關，因此對CDKAL1的兩種SNP位點檢測有助于分析人群中糖尿病風險分析。

信號轉導和轉錄活化因子(STAT4)參與JAK/STAT信號途徑，在Th1/Th2的分化調控及因此失調引發的各種自身免疫性疾病如1型糖尿病(T1DM)中發揮重要作用，在研究南方漢族人群中，STAT4rs7574865位點多態性與T1DM的發病強相關，因此STAT4位點多態性在T1DM中有重要作用。

目前，檢測基因多態性和基因突變的方法主要有sanger測序法、基因芯片雜交法、PCR-RFLP法和熒光定量PCR法。Sanger測序法是突變分析的金標準，能發現已知和未知突變位點，但儀器昂貴，靈敏度低，操作復雜，周期長，容易污染；普通PCR-RFLP方法技術簡便，價格便宜，適宜少量樣本的實驗室檢測，但僅能檢測有酶切位點的突變，無酶切位點不能檢測，存在由PCR產物污染導致假陽性的風險；基因芯片技術具有高通量，微型化，自動化等特點，適用于全基因組突變掃描，不適宜單個基因的突變位點檢測，且精度低，價格昂貴，這些缺點限制了這三種方法在實際臨床工作中的發展和應用，無法滿足快速指導臨床評估要求。因此，一種快速、準確且低成本的新型檢測方法成為了臨床檢查的迫切需求。

發明內容