[發明專利]一種芍藥離體再生體系建立方法

在審

• 申請號: 201810296051.1
• 申請日: 2018-04-04
• 公開（公告）號: CN108575746A
• 公開（公告）日: 2018-09-28
• 發明（設計）人: 蔣建華;周小成;許奇華;吳仁洲;程愛群
• 申請（專利權）人: 蔣建華
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種芍藥離體再生體系建立方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：外植體獲得-愈傷組織制備-不定芽分化-繼代增殖-根誘導-煉苗-移栽。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法的具體步驟如下：

（1）外植體的獲得：3月下旬至4月初選取幼嫩的芍藥葉片，用清水沖洗干凈，然后用洗滌劑漂洗一次，搖床上振蕩15-20min；流水沖洗3min后，于無菌操作臺上用75％乙醇消毒10-20s，立即倒入0.1％的升汞，最后用無菌水洗滌2次，將消毒完畢的葉片切割為2cm長的小段；

（2）愈傷組織制備：取步驟（1）中處理得到的外植體小段，接種于誘導培養基中進行愈傷組織的誘導，首先暗培養7-10d，然后進行光照培養25d；所述光照培養條件為：光照時間為14h/d，光照強度為1500lx；所述誘導培養基為MS+蔗糖30g/L+KT 1mg/L+IBA 0.02mg/L；

（3）不定芽分化：將步驟（2）中誘導得到的愈傷組織，在外植體上切下，接入分化培養基進行不定芽分化，光照時間14h/d，光照強度2500lx；所述分化培養基為1/2MS+NAA0.6mg/L+CPPU 0.3mg/L；

（4）繼代培養：將誘導得到的不定芽切割后，接入含有繼代增殖培養基的試管中進行繼代培養25d，所述繼代增殖培養基為1/2MS＋NAA0.5mg/L；

（5）根誘導：將步驟（4）中繼代增殖得到的試管苗接入含有生根培養基的瓶中進行生根培養，所述生根培養基為1/2MS+ IBA 2.0mg/L；待不定根長滿瓶底，植株整體生長穩健時，準備移苗出瓶；

(6) 煉苗：將培養瓶的瓶蓋打開，煉苗2-3天，然后將根浸泡在生根制劑中，15min；

（7）移栽。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，誘導培養基、分化培養基、繼代增殖培養基、生根培養基pH值為5.4-6.0。

4.根據權利要求2-3所述的方法，其特征在于所述生根制劑為微生物促生根劑，其組成包括：

淡紫灰鏈霉菌、解淀粉芽孢桿菌、短小芽孢桿菌、萘乙酸鈉、活性炭、蔗糖。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在所述生根制劑的具體組成為：

淡紫灰鏈霉菌發酵液：解淀粉芽孢桿發酵液：短小芽孢桿菌發酵液：萘乙酸鈉：活性炭；蔗糖的重量比為3:1:3:1:1:2。

6.根據權利要求4-5所述的方法，其特征在于：

所述淡紫灰鏈霉菌為CGMCC NO.2130；

所述解淀粉芽孢桿菌為ATCC23843；

所述短小芽孢桿菌為ATCC7061。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述生根制劑制備方法為：首先將淡紫灰鏈霉菌、解淀粉芽孢桿、短小芽孢桿菌按照常規方式活化，然后培養至活菌數為10⁷個/克的發酵液，將上述發酵液按照質量比例3:1:3混合，按照重量配比添加萘乙酸鈉、活性炭、蔗糖即得。

8.根據權利要求1-7所述方法，其特征在于，所述芍藥為杭白芍品種。

9.權利要求1-8所述方法用于獲得芍藥離體再生體系的用途。

10.權利要求1-9所述方法獲得的杭白芍外植體。