[發(fā)明專利]基于天然組織來源的腦組織脫細胞材料的制備方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201810294593.5 | 申請日: | 2018-04-04 |
| 公開(公告)號: | CN108578774A | 公開(公告)日: | 2018-09-28 |
| 發(fā)明(設計)人: | 林賢豐;王輝;范順武;王晟毓 | 申請(專利權)人: | 浙江大學 |
| 主分類號: | A61L27/36 | 分類號: | A61L27/36;A61L27/50 |
| 代理公司: | 杭州求是專利事務所有限公司 33200 | 代理人: | 忻明年 |
| 地址: | 310058 浙江*** | 國省代碼: | 浙江;33 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 脫細胞 腦組織 天然組織 蛋白酶抑制劑 制備 免疫排斥反應 生物相容性 正常腦組織 細胞 技術獲得 抗原物質 生理鹽水 生物材料 天然來源 異種細胞 哺乳動物 微環(huán)境 去除 取材 保留 | ||
1.基于天然組織來源的腦組織脫細胞材料的制備方法,其特征在于,該方法具體包括以下步驟:
(1)取宰殺12h以內任意哺乳動物腦組織,用含蛋白酶抑制劑的PBS緩沖液漂洗3次,每次30min,去除血液,貼附的脂肪碎片和其他雜質;
(2)在含蛋白酶抑制劑的PBS緩沖液中,在4℃溫度下用搖床100rpm震蕩4-14小時;然后用液氮凍融3個循環(huán);
(3)在含Triton X的PBS緩沖液中,加入混合抗菌液,在4℃溫度下用搖床100rpm震蕩4-12小時;
(4)在含SDS的PBS緩沖液中,加入混合抗菌液,在4℃溫度下用搖床100rpm震蕩4-12小時;
(5)在含DNA酶的PBS緩沖液中,加入混合抗菌液,37℃搖床120rpm震蕩4-12小時;
步驟(2)-(5)中,每個步驟完成后均用生理鹽水沖洗5小時。
2.根據(jù)權利要求1所述的基于天然組織來源的腦組織脫細胞材料的制備方法,其特征在于:所述含蛋白酶抑制劑的PBS緩沖液,蛋白酶抑制劑濃度為10-50K IU/ml。
3.根據(jù)權利要求1所述的基于天然組織來源的腦組織脫細胞材料的制備方法,其特征在于:所述含Triton X的PBS緩沖液為體積濃度0.05%-1%的Triton X-100或Triton X-200的PBS緩沖液。
4.根據(jù)權利要求1所述的基于天然組織來源的腦組織脫細胞材料的制備方法,其特征在于:所述含SDS的PBS緩沖液為體積濃度0.02%-0.15%的SDS的PBS緩沖液。
5.根據(jù)權利要求1所述的基于天然組織來源的腦組織脫細胞材料的制備方法,其特征在于:所述含DNA酶的PBS緩沖液為濃度為1-2mg/mL DNA酶PBS緩沖液。
6.根據(jù)權利要求1所述的基于天然組織來源的腦組織脫細胞材料的制備方法,其特征在于:所述混合抗菌液中青霉素和鏈霉素的濃度分別為20K IU/ml,20g/ml;青霉素和鏈霉素的比例為1:1,加入的混合抗菌液與原溶液體積比為1:1。
7.根據(jù)權利要求1所述的基于天然組織來源的腦組織脫細胞材料的制備方法,其特征在于:所述的液氮凍融3個循環(huán)中循環(huán)的溫度為從-80℃~37℃。
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