[發明專利]一種臨床檢測HBV cccDNA的微滴式數字PCR方法及試劑盒有效
| 申請號： | 201810292776.3 | 申請日： | 2018-03-30 |
| 公開（公告）號： | CN108285931B | 公開（公告）日： | 2021-01-01 |
| 發明（設計）人： | 劉松梅;黃景濤 | 申請（專利權）人： | 武漢大學 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/6851;C12Q1/6886 |
| 代理公司： | 武漢科皓知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 42222 | 代理人： | 彭勁松 |
| 地址： | 430072 湖*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 臨床 檢測 hbv cccdna 微滴式 數字 pcr 方法 試劑盒 | ||
1.檢測血清cccDNA含量和血清HBV DNA拷貝數的試劑在制備肝癌早期診斷試劑盒中的應用，其特征在于：血清cccDNA含量的cut-off值為211.9copy/mL；
檢測血清cccDNA含量的試劑包含用于擴增HBV cccDNA的cccDNA引物對和探針，以及用于擴增管家基因的引物對和探針；
其中，用于擴增HBV cccDNA的cccDNA引物對和探針為：
cccDNA-F：5’-TTCTCCGTCTGCCGTTCC-3’，
cccDNA-R：5’-CACAGCTTGGAGGCTTGA-3’，
cccDNA-probe：5’-熒光基團-CACCAAATATTGCCCAAGGT-淬滅基團-3’。
2.一種肝癌早期診斷試劑盒，其特征在于：包含HBV cccDNA定量檢測ddPCR試劑盒和HBV定量檢測試劑盒；
所述的HBV cccDNA定量檢測ddPCR試劑盒包含用于擴增HBV cccDNA的cccDNA引物對和探針，以及用于擴增管家基因的引物對和探針；
其中，用于擴增HBV cccDNA的cccDNA引物對和探針為：
cccDNA-F：5’-TTCTCCGTCTGCCGTTCC-3’，
cccDNA-R：5’-CACAGCTTGGAGGCTTGA-3’，
cccDNA-probe：5’-熒光基團-CACCAAATATTGCCCAAGGT-淬滅基團-3’；
所述的HBV cccDNA定量檢測ddPCR試劑盒的cut-off值為211.9copy/mL；
所述的HBV定量檢測試劑盒可檢測HBV DNA拷貝數。
3.根據權利要求2所述的肝癌早期診斷試劑盒，其特征在于：所述的HBV cccDNA定量檢測ddPCR試劑盒中的管家基因為β-actin基因，用于擴增β-actin基因的引物對和探針為：
β-actin-F：5’-CCTCGCTGTCCACCTTCCA-3’，
β-actin-R：5’-TCACCTTCACCGTTCCAGTTTT-3’，
β-actin-probe：5’-熒光基團-AGATGAGATTGGCATGGCTTT-淬滅基團-3’。
4.根據權利要求2所述的肝癌早期診斷試劑盒，其特征在于：所述的HBV cccDNA定量檢測ddPCR試劑盒包含陰性質控品和陽性質控品。
5.根據權利要求4所述的肝癌早期診斷試劑盒，其特征在于：所述的陰性質控品為pMD18-T空載質粒，所述的陽性質控品為插入有cccDNA片段的pMD18-T陽性質粒。
6.根據權利要求2所述的肝癌早期診斷試劑盒，其特征在于：所述的HBV cccDNA定量檢測ddPCR試劑盒包含ddPCR試劑和PSAD酶消化試劑。
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