[發(fā)明專利]一種檢測白蛋白的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810289038.3
• 申請日: 2018-04-03
• 公開（公告）號: CN108398413A
• 公開（公告）日: 2018-08-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王紅;郭小峰;姬妍;張華山
• 申請（專利權(quán)）人: 武漢大學(xué)
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N33/68
• 代理公司: 武漢科皓知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 42222
• 代理人: 馬麗娜

本發(fā)明公開了一種檢測生物樣品中白蛋白的方法，向含白蛋白的樣品中，加入式(I)所示結(jié)構(gòu)的熒光探針，在溫度為20?37℃條件下，培養(yǎng)20分鐘以上；無需分離，直接檢測培養(yǎng)液的黃色熒光強度；其中，式(I)所示結(jié)構(gòu)的熒光探針如說明書中所定義。在生理條件下，該熒光探針的水分散液沒有熒光，但該熒光探針可以選擇性地和白蛋白結(jié)合，熒光恢復(fù)，整個過程僅需5分鐘，且其結(jié)合物可穩(wěn)定存在，絕大多數(shù)蛋白質(zhì)不干擾少數(shù)特定蛋白質(zhì)的檢測，生物介質(zhì)背景干擾小，可用熒光分光光度計進行直接檢測。該檢測方法條件溫和，反應(yīng)迅速，靈敏度高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種檢測白蛋白的方法，屬于蛋白質(zhì)的生物檢測技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

蛋白質(zhì)是生命的物質(zhì)基礎(chǔ)，許多疾病及衰老等生物過程與蛋白質(zhì)有著密切的關(guān)系，因此蛋白質(zhì)的測定在生命科學(xué)、生物化學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)中具有重要意義。近些年來發(fā)展了很多蛋白質(zhì)分析方法，包括共振光散射技術(shù)、熒光光度法和紫外分光光度法，其中熒光分析法以其高選擇性和高靈敏度的優(yōu)勢備受關(guān)注。這些熒光分析方法基于探針和蛋白質(zhì)的結(jié)合方式分為共價結(jié)合和非共價鍵結(jié)合，所用探針多為小分子有機熒光探針，這些探針通常具備對蛋白質(zhì)種類不具備選擇性，通常用于檢測總蛋白，而難以實現(xiàn)特定蛋白質(zhì)的檢測。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對小分子熒光探針檢測蛋白質(zhì)的選擇性問題，提出一種非共價結(jié)合且具備較好選擇性的解決方案及所需熒光探針，以用于特定蛋白質(zhì)的快速檢測。

本發(fā)明所采用的技術(shù)方案具體如下：

一種檢測白蛋白的方法，包括以下步驟：

(1)向含白蛋白的樣品中，加入式(I)所示結(jié)構(gòu)的熒光探針，在溫度為20-37℃條件下，培養(yǎng)20分鐘以上；

(2)檢測步驟(1)獲得的培養(yǎng)液的黃色熒光強度；

其中，R₁-R₃獨立地選自C_1-10烷基，R₄-R₈獨立地選自H或C_1-10烷基。

優(yōu)選地：

本發(fā)明使用的熒光探針的結(jié)構(gòu)為：

所述的白蛋白為人血清白蛋白或牛血清白蛋白。

培養(yǎng)液的pH值為2-4或7-9。

培養(yǎng)液的pH值為8。

培養(yǎng)液中熒光探針的濃度為5μM-60μM。

步驟(2)中，激發(fā)波長為572nm，發(fā)射波長為586nm。

本發(fā)明所采用的熒光探針具有較強的疏水性，在有機溶劑中具有強熒光，在水溶液中不能溶解，幾乎沒有熒光。在生理條件下，該熒光探針的水分散液沒有熒光，但該熒光探針可以選擇性地和某些蛋白質(zhì)結(jié)合，熒光恢復(fù)，整個過程僅需5分鐘，且其結(jié)合物可穩(wěn)定存在，具體原理尚不明確。該檢測方法簡單，無需復(fù)雜的共價標(biāo)記過程，適用于檢測能與該熒光探針發(fā)生作用的少數(shù)幾種蛋白質(zhì)。

本發(fā)明具有以下優(yōu)點和有益效果：

1.本發(fā)明采用的熒光探針與特定蛋白質(zhì)在反應(yīng)前后熒光強度變化顯著，靈敏性高，且不易受生物體中其他常見蛋白質(zhì)的干擾。

2.該檢測方法簡單，反應(yīng)迅速，條件溫和。

附圖說明

圖1為熒光探針TMSHOB與牛血清白蛋白的反應(yīng)隨時間增加熒光強度的變化圖。

圖2為熒光探針TMSHOB與不同濃度的牛血清白蛋白在20mM磷酸緩沖溶液(pH＝7.4)中反應(yīng)后的熒光光譜圖，熒光強度隨牛血清白蛋白的濃度增大而增強。