[發明專利]抗人IgM單克隆抗體、其雜交瘤細胞株及應用

有效

• 申請號: 201810288637.3
• 申請日: 2018-03-30
• 公開（公告）號: CN108384761B
• 公開（公告）日: 2020-08-11
• 發明（設計）人: 黃家菊;王磊;舒川;李嵐敏;何濤;龍騰鑲
• 申請（專利權）人: 四川邁克生物新材料技術有限公司
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/42;G01N33/68;G01N33/569;C12R1/91
• 代理公司: 北京派特恩知識產權代理有限公司 11270
• 代理人: 王子曄;張穎玲

本發明涉及雜交瘤細胞株及其所分泌單克隆抗體，所述抗體能與人IgM特異性結合，并可用于人IgM的體外檢測，尤其適合用于乙型肝炎病毒的早期診斷。本發明還涉及包括所述雜交瘤細胞株或單克隆抗體的試劑盒。

技術領域

本發明涉及一種單克隆抗體，特別涉及一種抗人IgM的單克隆抗體。

背景技術

免疫診斷試劑是體外診斷試劑的主要類型之一。其利用抗原與抗體互相結合的特異性反應來進行定性或定量的診斷，無論是技術還是市場，此類試劑在目前所有診斷試劑產品中發展最快。

病原微生物感染人體后，在刺激誘導體液免疫應答的過程中IgM型抗體最先產生，感染性疾病的早期診斷是進行早期、有效治療的前提，特別是對于起病急，病情兇險的感染性疾病，早期診斷尤為重要，由于感染后機體最先出現的抗體為IgM型抗體，故檢測發病初期患者血液中特異性IgM抗體在臨床早期診斷中具有重要的意義。

近年來，存在一些關于抗人IgM單克隆抗體的研究，如專利文獻WO 2010026758 A1中公開了一種抗人IgM單克隆抗體，該專利旨在解決多克隆抗體特異性低的問題，并著重考察了單克隆抗體誘導人IgM之間凝集的性質并驗證了其抑制非特異反應的效應，但并未關注于該抗人IgM單克隆抗體用于體外診斷試劑時的系統性評價(如、抗體效價、交叉反應性、穩定性、檢測靈敏度及特異性等)，因而，該抗體是否適于制備體外診斷試劑是不明確的。

又例如，廈門波生生物抗人IgM單克隆抗體是常見的商品化抗人IgM單克隆抗體，但是其穩定性欠佳，從而在用于免疫診斷抗體時存在不足。

實際上，篩選用于制備體外診斷試劑的單克隆抗體是一個復雜的過程，首先要獲得很好的抗原，來制備足夠多的抗體，然后對抗體進行系統的評價，獲得具有臨床相關性的候選抗體，再開發成檢測試劑。其中，抗體效價、交叉反應性、穩定性和臨床效果等均是重要的評價因素，如抗體效價高低反映了一定濃度下與抗原反應的最低滴度，滴度越低效價越高；抗體交叉反應性可影響該抗體的特異性；抗體的穩定性會直接影響最終結果的可靠性，而穩定性較差的抗體對保存條件、操作條件要求更高，從而降低了其作為診斷試劑的實用性及結果的可靠性，并不可避免地引起成本的上升；臨床試驗則用來說明抗體在診斷某種特定疾病時的效果。

因此，為了在體外診斷方面的應用，本領域急需系統性評價結果較佳，且尤適用于病原感染的早期診斷的單克隆抗體。

發明內容

本發明的目的是提供一種抗人IgM單克隆抗體、分泌該抗體的雜交瘤細胞株、含上述單克隆抗體或雜交瘤細胞株的試劑盒以及它們在檢測人IgM中的用途。通過系統性評價，所述抗體在各方面均有較佳表現，從而適合作為免疫診斷試劑用于制備體外診斷試劑盒，尤其適合制備檢測乙型肝炎病毒的早期診斷試劑盒。

為此，本發明人進行了大量研究，通過人IgM來免疫小鼠，細胞融合后經有限稀釋法克隆至少4次，直到達到單克隆，從得到的眾多克隆中篩選到1株能穩定分泌抗體的新型雜交瘤細胞株(Hybridoma)IgM-10，并于2018年3月8日將其保藏于中國典型培養物保藏中心，湖北省武漢市武昌珞珈山武漢大學，保藏編號為CCTCC NO:C201852，從而完成了本發明。

在第一個方面，本發明提供了一種雜交瘤細胞株，其保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO:C201852。

在第二個方面，本發明提供了一種單克隆抗體，所述單克隆抗體能夠與人IgM特異性結合。

在一個實施方式中，所述單克隆抗體不與人IgG、鼠IgG、兔IgG或牛IgG結合。

在另一個實施方式中，所述單克隆抗體的中值效價為296600且在反復凍融、長期保存、熱加速惡劣條件下具有更優的穩定性和可靠性。

在一個優選的實施方式中，所述單克隆抗體是由本發明的雜交瘤細胞株分泌的抗體。