[發(fā)明專利]剛毛檉柳MYB轉(zhuǎn)錄因子編碼基因及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810288452.2
• 申請(qǐng)日: 2018-03-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108342395B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-11-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 高彩球;張騰倩;劉中原;李新蘋;呂佳欣;雷曉錦
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 東北林業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/29
• 分類號(hào): C12N15/29;C12N15/82;C07K14/415;A01H5/00;A01H6/20;A01H6/82
• 代理公司: 哈爾濱市偉晨專利代理事務(wù)所(普通合伙) 23209
• 代理人: 榮玲

1.剛毛檉柳MYB轉(zhuǎn)錄因子編碼基因，即剛毛檉柳ThMYB基因，其特征在于所述剛毛檉柳ThMYB基因的cDNA序列如SEQ ID No：1所示。

2.如權(quán)利要求1所述剛毛檉柳ThMYB基因，其特征在于所述cDNA序列編碼的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

3.一種含有權(quán)利要求1所述剛毛檉柳ThMYB基因的植物過(guò)表達(dá)載體，其特征在于，其構(gòu)建方法為：根據(jù)植物過(guò)表達(dá)載體pROKII的多克隆位點(diǎn)及ThMYB基因特征，通過(guò)在ThMYB基因5’端和3’端分別引入XbaI和KpnI限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)設(shè)計(jì)了如SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10所示的基因特異性上下游引物pROKⅡ-ThMYB-F和pROKⅡ-ThMYB-R，以檉柳cDNA為模板，進(jìn)行ThMYB基因RT-PCR克隆；

使用膠回收試劑盒對(duì)擴(kuò)增目的片段進(jìn)行回收，用KpnI和XbaI酶分別對(duì)膠回收ThMYB基因產(chǎn)物和pROKII質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切，分別回收后用T4連接酶進(jìn)行連接，將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化到大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，挑取大腸桿菌感受態(tài)單克隆，利用如SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10所示的基因特異性上下游引物pROKⅡ-ThMYB-F、pROKⅡ-ThMYB-R和SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8所示的過(guò)表達(dá)載體pROKII的上下游引物pROKⅡ-F、pROKⅡ-R進(jìn)行PCR驗(yàn)證，并進(jìn)一步測(cè)序驗(yàn)證，序列正確的載體即為ThMYB基因過(guò)表達(dá)載體，命名為pROKⅡ-ThMYB。

4.一種含有權(quán)利要求3所述植物過(guò)表達(dá)載體的重組基因工程菌。

5.如權(quán)利要求1所述的剛毛檉柳ThMYB基因在提高植物耐鹽性或選育耐鹽性轉(zhuǎn)基因植物中的應(yīng)用。

6.如權(quán)利要求5所述剛毛檉柳ThMYB基因的應(yīng)用，其特征在于所述應(yīng)用包括構(gòu)建含有剛毛檉柳ThMYB基因的植物過(guò)表達(dá)載體，將所構(gòu)建的植物過(guò)表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到木本植物中，培育得到耐鹽性轉(zhuǎn)基因木本植物。

7.如權(quán)利要求6所述剛毛檉柳ThMYB基因的應(yīng)用，其特征在于所述木本植物為楊樹(shù)或白樺樹(shù)。

8.如權(quán)利要求5所述剛毛檉柳ThMYB基因的應(yīng)用，其特征在于所述應(yīng)用包括構(gòu)建含有剛毛檉柳ThMYB基因的植物過(guò)表達(dá)載體，將所構(gòu)建的植物過(guò)表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到草本植物中，培育得到耐鹽性轉(zhuǎn)基因草本植物。

9.如權(quán)利要求8所述剛毛檉柳ThMYB基因的應(yīng)用，其特征在于所述草本植物為擬南芥或煙草。