[發明專利]β1;4半乳糖基轉移酶I的檢測系統

在審

• 申請號: 201810287811.2
• 申請日: 2018-04-03
• 公開（公告）號: CN108300760A
• 公開（公告）日: 2018-07-20
• 發明（設計）人: 王友華;徐華;陳民浩;孫馳;沈愛國
• 申請（專利權）人: 南通大學附屬醫院
• 主分類號: C12Q1/48
• 分類號: C12Q1/48;C12Q1/6883;G01N33/573;A61K49/00
• 代理公司: 北京科家知識產權代理事務所(普通合伙) 11427
• 代理人: 梁金娟

本發明提供一種β1,4半乳糖基轉移酶I的檢測系統，包括：（1）整體水平檢測系統，分析GalT?I在RA炎癥過程中表達的時空變化，及其與炎癥相關粘附分子表達、糖鏈修飾之間的關系；（2）細胞水平檢測系統，分析GalT?I的表達及相關糖鏈的合成在RA成纖維樣滑膜細胞和軟骨細胞在炎癥過程中的作用及機制；（3）運用實驗性大鼠CIA模型，分析GalT?I的表達與RA炎癥過程之間的關系；（4）探討滑膜組織中GalT?I的表達水平在RA患者診斷、預后評價中的意義；（5）結合整體、離體實驗、CIA模型及臨床研究，綜合分析GalT?I在RA疾病過程中的作用及意義。本發明利用骨科學、分子免疫學及糖生物學等，為類風濕關節炎患者的早期臨床診斷、病程監測、預后判斷及新藥的研制提供新方法。

技術領域

本發明屬于分子生物學和醫學領域，具體涉及一種β1,4半乳糖基轉移酶I的檢測系統。

背景技術

類風濕性關節炎（rheumatoid arthritis，RA）是一種累及周圍關節為主的多系統炎癥性自身免疫疾病。大部分病情呈進展性、破壞性，若對其慢性進行性發病過程未及時診治，約有1/3的患者將致殘，且期望壽命縮短10～15年，還有部分病情迅速進展、導致嚴重殘廢以至死亡。本病呈全球性分布，據國外統計，輕型患者（包括只有一次發作者）約占全人口的2.5%，1950～1970年對美國羅切斯特和密蘇里達地區的調查表明，男性每10萬人口中為28.5人，女性每10萬人口中為67.5人，總發病率為每10萬人口中有29人。我國的發病情況大致相同，現估計患類風濕關節炎的人數約在2000萬以上，重型的也有200余萬人，RA是造成我國勞動力喪失和致殘的主要疾病之一。

RA是一種炎癥性自身免疫疾病，其確切的病因尚不清楚，可能和遺傳和外界環境因素有關，其致炎過程極為復雜，是由多種細胞因子、黏附分子和趨化因子等參與的復雜的免疫炎癥過程，是多基因協同作用的結果。由于其遺傳多樣性和發病機制的復雜性，使得人們對RA研究成為當前關節科學臨床和基礎研究的熱點之一。RA的主要病理改變是滑膜炎，急性期滑膜表現為滲出性和細胞浸潤性，當病變進入慢性期，滑膜變得肥厚，形成許多絨毛樣突起，突向關節腔內或侵入到軟骨和軟骨下骨質。正常人滑膜細胞層僅有1～3層，而RA的滑膜細胞體積增大、細胞層數增多達8～10層，并多有淋巴細胞浸潤，主要是T細胞。T淋巴細胞活化后產生γ干擾素、白細胞介素2 (interleukin-2，IL-2)、IL-6等，這些細胞因子刺激巨噬細胞（旁分泌）和T細胞（自分泌），分泌產生IL-1、IL-6和腫瘤壞死因子-α(tumornecrosis factor-α，TNF-α) 等致炎因子，作用于滑膜細胞、軟骨細胞產生金屬蛋白酶等導致關節組織降解，產生血管新生因子促使血管翳形成。因而細胞因子被認為是引起關節炎癥的主要因素。以“rheumatoid arthritis”，“cytokine”，“inflammation”，“pathogenesis”和“therapy”為關鍵詞，檢索PubMed數據庫2000-2013的英文文章，有九百多篇。研究關鍵炎癥分子在RA中表達及機制以至研制其抑制藥物，儼然成為21世紀攻破RA的熱門選擇。炎癥對機體的影響，一直是古老而又新鮮的課題。炎癥反應與人類許多疾病緊密相連，包括腫瘤、心血管疾病、自身免疫性疾病等等。隨著研究的深入，許多關節炎疾病如RA、骨性關節炎（osteoarthritis，OA）都與炎癥反應有關。關節的炎癥反應過程也和其它部位一樣，主要包括：血管通透性的改變，炎癥細胞的浸潤和吞噬，炎癥因子的釋放等等。眾所周知，細胞膜表面和細胞內密布有大量復雜多樣的糖復合物包括糖蛋白、糖脂、蛋白多糖等含糖鏈的生物大分子。它們廣泛參與組織結構形成和功能維持、腫瘤浸潤與轉移、以及自身免疫性疾病發生與發展等許多生理和病理過程。這些糖復合物中的糖鏈在其中發揮著非常重要的作用。糖鏈的合成需要各種各樣功能專一的糖基轉移酶，細胞可通過調節糖基轉移酶的表達、活性、底物特異性和組織表達特異性來調節各類糖復合物中糖鏈的生物合成，從而影響細胞的功能。在病原體感染與免疫應答過程中，糖基轉移酶及其糖鏈合成也發揮很大的作用。在感染及炎癥反應過程中，內皮細胞表面選擇素與表達在白細胞上的相應糖配體 (sialyl Lewis x， sLex) 結合，使白細胞在內皮細胞上滾動，繼而穿出血管趨向炎癥部位。這一過程得以順利完成有賴于相應的糖基轉移酶對糖配體糖鏈的加工修飾。而這個過程中sLex 的唾液酸化修飾是與β1,4半乳糖基轉移酶（β1,4 galactosyltransferase，β-1,4-GalT）密切相關的。