[發明專利]一種鼻咽癌患病風險檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201810286877.X
• 申請日: 2018-04-03
• 公開（公告）號: CN108504735B
• 公開（公告）日: 2021-07-23
• 發明（設計）人: 何志巍;黃國良;彭述堂;曾柳燕;許南松
• 申請（專利權）人: 廣東醫科大學
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 北京匯彩知識產權代理有限公司 11563
• 代理人: 彭遜

本發明提供了一種鼻咽癌患病風險檢測試劑盒，用于檢測人ATF1rs11169571位點T/C突變，所述試劑盒包括：蛋白酶K、緩沖液GB、緩沖液GD、漂洗液PW、超純水、ATF1上游引物，ATF1下游引物，Go Taq Green Master Mix 2x，RNase Free H₂O，Hind III酶，buffer10x，TBE緩沖液，瓊脂糖，溴化乙錠，溴酚藍指示劑；所述ATF1上游引物為5’?CGCACGATATCTAGTGACAGAGG?3’，所述ATF1下游引物為5’?TGCAAACCTGTAGGGTAAATGG?3’。

技術領域

本發明涉及生物技術檢測領域，具體涉及一種鼻咽癌患病風險檢測試劑盒及人ATF1 rs11169571單核苷酸多態性的測試方法。

背景技術

鼻咽癌(NPC)是我國南方常見的惡性腫瘤，廣東為高發區。鼻咽癌是指鼻咽粘膜上皮發生的癌腫，大多為低分化鱗癌，其惡性度高，發病部位隱蔽，特別是在咽隱窩和鼻咽頂部者，早期癥狀不明顯，因而難以早期發現，誤診誤治率較高，可達12.2％，因而在確診的鼻咽癌中，其5年生存率長期徘徊在50％～60％左右。對鼻咽癌進行早期診斷以便早期治療，提高患者的生存率一直是NPC臨床研究的重要課題之一。

目前對鼻咽癌早期的檢測方法有多種，包括有：EB病毒血清學標記物如病毒殼抗原一免疫球蛋白、EB病毒潛伏膜蛋白、EB病毒早期復合抗原的抗體檢測，鼻咽癌相關腫瘤標記物如白細胞介素、腫瘤壞死因子、細胞間黏附分子、CYFRA 2121以及端粒酶等的檢測。雖然這些指標的單獨或聯合應用為鼻咽癌的診斷提供了有用的信息，然而它們均缺乏足夠的靈敏度與特異性。建立一種能對鼻咽癌患者進行篩查、診斷的無創性檢測方法，對鼻咽癌的早期篩查、診斷、預防及治療等具有重要意義。

發明內容

本發明公開了一種鼻咽癌患病風險檢測試劑盒及人ATF1rs11169571單核苷酸多態性的測試方法，通過使用本發明的檢測試劑盒，實現了對人ATF1 rs11169571單核苷酸多態性的檢測，根據所得的人ATF1 rs11169571位點T/C突變結果作為鼻咽癌患病風險的評價指標。

本發明的第一方面公開了一種鼻咽癌患病風險檢測試劑盒，用于檢測人ATF1rs11169571位點T/C突變，所述試劑盒包括：蛋白酶K、緩沖液GB、緩沖液GD、漂洗液PW、超純水、ATF1上游引物，ATF1下游引物，Go Taq Green Master Mix 2x，RNase Free H₂O，HindIII酶，buffer 10x，TBE緩沖液，瓊脂糖，溴化乙錠，溴酚藍指示劑；所述ATF1上游引物為5’-CGCACGATATCTAGTGACAGAGG-3’，所述ATF1下游引物為5’-TGCAAACCTGTAGGGTAAATGG-3’。

本發明的第二方面公開了一種人ATF1rs11169571單核苷酸多態性的測試方法，其特征在于使用權利要求1所述的鼻咽癌患病風險檢測試劑盒，包括以下步驟：

(1)血液基因組DNA的提取；

(2)將步驟1提取的DNA，ATF1上游引物，ATF1下游引物，Go Taq Green Master Mix2x，RNase Free H₂O加入PCR管中，在PCR儀中進行PCR反應；

(3)將步驟2得到的PCR產物，RNase Free H₂O，Hind III酶，buffer 10x進行酶切實驗；

(4)通過水平式瓊脂糖凝膠電泳法檢測步驟3中的酶切產物；

(5)采用卡方檢驗，Logistics回歸分析對步驟4的實驗結果進行分析。

進一步地，所述步驟2中PCR儀的反應條件為：依次95℃5min，95℃40s，58℃40s，72℃40s，72℃5min進行45個循環。

發明的有益效果