[發(fā)明專利]一種(S)-羰基還原酶及其編碼基因與應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810286507.6
• 申請日: 2018-03-30
• 公開（公告）號: CN108624603A
• 公開（公告）日: 2018-10-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 賈振華;李冉;宋水山;宋聰;黃亞麗;黃媛媛;趙芊
• 申請（專利權(quán)）人: 河北省科學(xué)院生物研究所
• 主分類號: C12N15/53
• 分類號: C12N15/53;C12N9/04;C12P7/22
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 劉奇

1.一種來源于紅平紅球菌(Rhodococcus erythropolis)的羰基還原酶基因，其核苷酸序列為如下1)-3)中任一所述的基因：

1)SEQ ID NO：1所示的基因；

2)在高嚴(yán)謹(jǐn)條件下與1)所述基因雜交且編碼相同蛋白的基因；

3)與1)或2)所述的基因具有90％以上的同源性且編碼相同蛋白的基因；

上述高嚴(yán)謹(jǐn)條件為用0.1×SSPE或SSC，0.1％SDS的溶液，在DNA或者RNA雜交實驗中65℃下雜交并洗膜。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因，其特征在于，所述SEQ ID NO：1核苷酸序列由紅平紅球菌總DNA為模板，以SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示引物擴增得到。

3.一種由權(quán)利要求1或2所述羰基還原酶基因編碼的(S)-羰基還原酶ReADH。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的(S)-羰基還原酶ReADH，其特征在于，是如下a或b的蛋白質(zhì)：

a、SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；

b、SEQ ID NO：2的氨基酸殘基序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有羰基還原酶活性的衍生蛋白質(zhì)。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的(S)-羰基還原酶ReADH，其特征在于，所述羰基還原酶ReADH的氨基末端或羧基末端連接有下列標(biāo)簽：Poly-Arg、Poly-His、FLAG、Strep-tagII或c-myc。

6.含有權(quán)利要求1或2所述(S)-羰基還原酶基因的表達(dá)盒、重組載體、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系及重組菌。

7.權(quán)利要求3～5任意一項所述的(S)-羰基還原酶ReADH作為生物催化劑在還原苯乙酮生成(S)-α-苯乙醇中的應(yīng)用。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用包括以下步驟：

將所述羰基還原酶ReADH在NADH或NADPH的存在下對底物苯乙酮進(jìn)行催化反應(yīng)，得到(S)-α-苯乙醇，所述催化反應(yīng)的溫度為30～45℃，催化反應(yīng)的pH值為4.5～7.5，催化反應(yīng)的時間為8～24h。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，所述羰基還原酶ReADH與所述苯乙酮的用量比為(1～5)U:(0.1～500)mmol。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，所述NADH或NADPH與所述苯乙酮的用量比為(0.5～1)mg:(0.1～200)mmol。