[發明專利]一種小麥三位點表達HMW-GS數目變異全套近等基因系的創制方法

在審

• 申請號: 201810285596.2
• 申請日: 2018-04-03
• 公開（公告）號: CN108522263A
• 公開（公告）日: 2018-09-14
• 發明（設計）人: 代壽芬;顏澤洪;魏育明;劉登才;鄭有良
• 申請（專利權）人: 四川農業大學
• 主分類號: A01H1/02
• 分類號: A01H1/02;A01H1/04;A01H6/46;A01H5/10
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 夏艷

1.一種小麥三位點表達的HMW-GS數目變異全套近等基因系的創制方法，其特征在于，包括以下操作：

1)以A、B和D 3個基因組Glu-1位點所有HMW-GS均不表達的小麥為母本，以Glu-A1,Glu-B1和Glu-D1 3個Glu-1位點均表達、表達數目為3-5個HMW-GS的小麥為父本，進行雜交得到F₁種子；

2)將F₁種子分單粒種植于大田，開花前套袋自交，然后分別收獲單株F₂種子，選取其中兩株種子數100粒以上的F₂種子用于SDS-PAGE鑒定HMW-GS組成，在所選的每個單株中選擇HMW-GS組成與原父本HMW-GS蛋白表現型相同的所有含胚大半粒種子繼續種植，其余舍掉；

3)將選中的F₂種子分單粒種植成F₃株系，開花前套袋自交，單株收獲F₃種子；

4)每個F₃單株中隨機選取10粒種子，分單粒利用半粒法SDS-PAGE鑒定HMW-GS組成；選擇單株內A、B和D 3個基因組的Glu-1位點HMW-GS都在分離的單株為目標單株，目標單株內所有種子分單粒鑒定HMW-GS組成，選擇與原父本具有相同HMW-GS蛋白組成的所有單粒種子繼續種植；

5)重復步驟4)的自交步驟從F₄到F₅,從F₅的目標單株中鑒定所有種子的組成，并按HMW-GS表現型進行歸類種植，在F₆代鑒定出HMW-GS基因型純合穩定的全套近等基因系。

2.如權利要求1所述的小麥三位點表達的HMW-GS數目變異全套近等基因系的創制方法，其特征在于，F₃單株中的目標單株的選擇及種植為：

若F₃單株在A、B和D三個基因組Glu-1位點上均出現HMW-GS有、無分離則作為目標單株保留，直至任意鑒定到2個目標單株；若在任意1個Glu-1位點上HMW-GS組成在10粒種子間表現一致，為非目標單株將其淘汰；對于中選的目標單株，從中鑒定出與原父本HMW-GS蛋白表現型相同的全部種子，分單粒種植成F₄株系，開花前套袋自交，分單株收獲F₄種子。

3.如權利要求1所述的小麥三位點表達的HMW-GS數目變異全套近等基因系的創制方法，其特征在于，F₄、F₅單株中的目標單株的選擇及種植為：

每個F₄單株中隨機選取10粒種子，分單粒利用半粒法SDS-PAGE鑒定HMW-GS組成；若F₄單株在A、B和D三個基因組Glu-1位點上均出現有、無分離則作為目標單株保留，直至任意鑒定到2個目標單株；若在任意1個Glu-1位點上10粒種子HMW-GS組成表現一致，為非目標單株將其淘汰；對于中選的目標單株，從中鑒定出與原父本HMW-GS表現型相同的全部種子，分單粒種植成F₅株系，開花前套袋自交，分單株收獲F₅種子；

每個F₅單株中隨機選取10粒種子，分單粒利用半粒法SDS-PAGE鑒定HMW-GS組成；若F₅單株在A、B和D三個基因組的Glu-1位點上均均出現有、無分離則為目標單株保留，直至任意鑒定到2個目標單株；若在任意1個Glu-1位點上10粒種子HMW-GS組成表現一致，為非目標單株將其淘汰；對于中選的目標單株，鑒定所有種子的HMW-GS組成，根據HMW-GS組成進行歸類；將具有相同HMW-GS組成的種子，分單粒種植成F₆株系，開花前套袋自交，分單株收獲F₆種子。

4.如權利要求1所述的小麥三位點表達的HMW-GS數目變異全套近等基因系的創制方法，其特征在于，F₆單株中的近等基因系為：F₆單株中將每類HMW-GS組成單株均分單粒檢測10粒，只有當單株內10粒種子HMW-GS組成相同時，則認為其在Glu-1位點基因組成已純合并再檢測20粒確認，直至從所有類型中均鑒定到目標單株，這些單株互相為HMW-GS組成不同的近等基因系。