[發明專利]一種血清miRNA組合的微創檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201810284955.2
• 申請日: 2018-04-02
• 公開（公告）號: CN108588218B
• 公開（公告）日: 2022-09-16
• 發明（設計）人: 徐骎;石劍波;鮑欣;劉增贏;陳萬濤
• 申請（專利權）人: 上海交通大學醫學院附屬第九人民醫院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886
• 代理公司: 上海熠澗知識產權代理有限公司 31442
• 代理人: 何靜生

本發明提供了一種血清miRNA組合的微創檢測試劑盒。該試劑盒聯合使用miR?626、miR?1537?3p、miR?4286和miR?5100作為口腔鱗癌分子標記物，通過曲線擬合判斷單個個體的miR?626、miR?1537?3p、miR?4286和miR?5100的聯合表達水平。本試劑盒檢測快速方便、檢測靈敏度、特異度高、成本低，可以滿足絕大多數腫瘤病人的檢測需求，應用范圍極廣，經臨床驗證預測準確率高。

技術領域

本發明屬于血清標志物檢測技術領域，涉及一種血清miRNA組合的微創檢測試劑盒。

背景技術

miRNA作為生物分子標志物雖然具有獨特的優勢，但也存在一些技術問題。如果樣本量越大，獨立檢測隊列越多，那么miRNA預測準確性越高，越接近腫瘤人群整體的特征，但大樣本的收集與處理存在一定難度，原因是入組樣本有一定要求，符合要求樣本不易收集，樣本保存記錄工作量大。

目前主流篩選候選標志miRNA分子的手段一般是高通量方法初篩，然后再用即時聚合酶鏈式反應進行驗證。雖然方法穩定，技術上比較成熟，但也容易出現一些假陽性結果。利用探針法檢測候選miRNA分子，在提升檢測特異性的同時，也會降低實驗靈敏度，一定程度上會存在漏診率，且不同批次樣本與實驗試劑之間也會存在一些差異，而影響結果。

人體是一個復雜的體系，單一miRNA預測存在一定的誤診及漏診率，找尋腫瘤特異性的miRNA也是問題關鍵，只有檢測出腫瘤來源的miRNA，并對其進行分析才能更好的預測患者預后。

目前，同類型標志物試劑盒多數以檢測組織樣本為主，且屬于有創檢查。并且，同類型血清檢測分子通常為蛋白質，是一類容易降解，含量低，且受到檢測方法限制的大分子物質，無法準確預測患者預后。

發明內容

本發明針對現有技術的不足，其目的在于提供一種用于口腔鱗癌診斷及預后并且含有特定血清標志物的微創檢測試劑盒。

為達到上述目的，本發明的解決方案是：

miR-626、miR-1537-3p、miR-4286和miR-5100聯合使用作為口腔鱗癌分子標記物的應用，該應用不用于疾病的診斷和治療，判斷的方法為：

Y＝0.586×C_miR-626+0.407×C_miR-1537-3p+0.401×C_miR-4286+0.408×C_miR-5100；

其中，C_miR-626為單個個體100ul血清中miR-626的表達量，C_miR-1537-3p為該個體100ul血清中miR-1537-3p的表達量，C_miR-4286為該個體100ul血清中miR-4286的表達量，C_miR-5100為該個體100ul血清中miR-5100的表達量；

當Y≤5.282時，判斷為低表達值或低風險值；

當Y＞5.282時，判斷為高表達值或高風險值。

其中，miR-626的成熟核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，miR-1537-3p的成熟核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，miR-4286的成熟核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，miR-5100的成熟核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。

一種口腔鱗癌miRNA檢測試劑盒，其包括：總RNA抽提體系、PCR反轉錄體系、定量PCR體系；

所述總RNA抽提體系含有植物來源的ath-miR159a作為后繼定量PCR檢測時的標定外參；

所述PCR反轉錄體系含有TaqMan miRNA Assay探針引物；