[發明專利]基于上轉換熒光適配體傳感器的雙酚A和雌二醇檢測試劑盒及應用和檢測方法

有效

• 申請號: 201810283939.1
• 申請日: 2018-04-02
• 公開（公告）號: CN108801988B
• 公開（公告）日: 2021-03-30
• 發明（設計）人: 白家磊;王江;高志賢;彭媛;任舒悅;李雙;寧保安
• 申請（專利權）人: 軍事科學院軍事醫學研究院環境醫學與作業醫學研究所
• 主分類號: G01N33/74
• 分類號: G01N33/74;G01N21/64;B01J13/06
• 代理公司: 北京思創大成知識產權代理有限公司 11614
• 代理人: 高爽

1.一種基于上轉換熒光適配體傳感器的雙酚A和雌二醇檢測試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括以下組分：

（1）第一羧基化核/殼型上轉換納米顆粒NaYF4: Yb, Er@NaYF4: Nd；

（2）第二羧基化核/殼型上轉換納米顆粒NaYF4: Yb, Tm@NaYF4: Nd；

（3）目標物適配體序列和根據其互補鏈設計的適配體序列互補鏈正四面體結構的組成序列；所述目標物為雙酚A和雌二醇；所述正四面體結構的組成序列包括：適配體序列的互補鏈序列，與所述互補鏈序列中至少一部分形成正四面體結構的序列；

（4）黑磷納米金復合材料分散液；

雙酚A適配體序列為如SEQ ID NO：1所示的序列；根據其互補鏈設計的正四面體結構的組成序列包括：如SEQ ID NO：2所示的序列，如SEQ ID NO：3所示的序列，如SEQ ID NO：4所示的序列，如SEQ ID NO：5所示的序列；

雌二醇適配體序列為如SEQ ID NO：6所示的序列；根據其互補鏈設計的正四面體結構的組成序列包括：如SEQ ID NO：7所示的序列，如SEQ ID NO：8所示的序列，如SEQ ID NO：9所示的序列，如SEQ ID NO：10所示的序列；

所述第一羧基化核/殼型上轉換納米顆粒和雙酚A適配體序列以第一羧基化核/殼型上轉換納米顆粒偶聯雙酚A適配體序列的形式提供；所述第二羧基化核/殼型上轉換納米顆粒和雌二醇適配體序列以第二羧基化核/殼型上轉換納米顆粒偶聯雌二醇適配體序列的形式提供；

雙酚A適配體序列互補鏈正四面體結構序列和黑磷納米金復合材料分散液以Au-S鍵結合的黑磷納米金復合材料標記雙酚A適配體序列互補鏈正四面體結構序列的形式提供；雌二醇適配體序列互補鏈正四面體結構序列和黑磷納米金復合材料分散液以Au-S鍵結合的黑磷納米金復合材料標記雌二醇適配體序列互補鏈正四面體結構序列的形式提供。

2.根據權利要求1所述的基于上轉換熒光適配體傳感器的雙酚A和雌二醇檢測試劑盒，其中，所述第一羧基化核/殼型上轉換納米顆粒和所述第二羧基化核/殼型上轉換納米顆粒的粒徑為70-80nm，激發波長為808nm。

3.根據權利要求1所述的基于上轉換熒光適配體傳感器的雙酚A和雌二醇檢測試劑盒，其中，所述羧基化核/殼型上轉換納米顆粒通過包括以下步驟的方法制備：

（1）合成上轉換納米顆粒內核：將三氟乙酸釔、三氟乙酸鐿、三氟乙酸鉺與三氟乙酸鈉、油酸、1-十八烯和油胺混合反應，制得第一核/殼型上轉換納米顆粒內核；將三氟乙酸釔、三氟乙酸鐿、三氟乙酸銩與三氟乙酸鈉、油酸、1-十八烯和油胺混合反應，制得第二核/殼型上轉換納米顆粒內核；

（2）制備核/殼型上轉換納米顆粒：將所述第一核/殼型上轉換納米顆粒內核和所述第二核/殼型上轉換納米顆粒內核各自分散于有機溶劑中，分別加入三氟乙酸鈉、三氟乙酸釔、三氟乙酸釹、油酸、1-十八烯進行反應，制得第一核/殼型上轉換納米顆粒和第二核/殼型上轉換納米顆粒；

（3）制備羧基化核/殼型上轉換納米顆粒：將聚丙烯酸溶液分別與第一核/殼型上轉換納米顆粒和第二核/殼型上轉換納米顆粒混合，制得所述第一羧基化核/殼型上轉換納米顆粒和所述第二羧基化核/殼型上轉換納米顆粒。

4.根據權利要求1所述的基于上轉換熒光適配體傳感器的雙酚A和雌二醇檢測試劑盒，其中，所述黑磷納米金復合材料分散液通過如下方法制得：將黑磷晶體粉末與聚乙烯吡咯烷酮水溶液混合，超聲條件下進行反應，反應后離心去除未剝離完全的黑磷晶體沉淀，得到黑磷納米片；將黑磷納米片洗凈后超聲分散于水中，加入氯金酸水溶液，震蕩混合反應，離心去上清，清洗沉淀后分散于水中，得到所述黑磷納米金復合材料分散液。

5.權利要求1-4中任意一項所述的雙酚A和雌二醇檢測試劑盒在同時檢測雙酚A和雌二醇中的應用。

6.一種利用權利要求1-4中任意一項所述的雙酚A和雌二醇檢測試劑盒的雙酚A和/或雌二醇的檢測方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

1）建立目標物標準曲線：

1-1）將羧基化核/殼型上轉換納米顆粒偶聯目標物適配體、多個濃度的目標物標準品溶于雜交緩沖液中；

1-2）分別加入雙酚A和雌二醇的適配體序列互補鏈正四面體結構修飾的黑磷納米金復合材料，劇烈震蕩反應；

1-3）離心去除未連接的黑磷納米金，用雜交緩沖液反復洗滌；

1-4）進行熒光檢測，繪制目標物標準品的濃度與熒光猝滅值的標準曲線；

2）待測樣品中雙酚A和/或雌二醇的檢測：

2-1）將羧基化核/殼型上轉換納米顆粒偶聯目標物適配體溶于雜交緩沖液中；

2-2）加入含有雙酚A和/或雌二醇的待測樣品，震蕩孵育；

2-3）加入雙酚A和/或雌二醇的適配體序列互補鏈正四面體結構修飾的黑磷納米金復合材料，劇烈震蕩反應；

2-4）離心去除未連接的黑磷納米金，用雜交緩沖液反復洗滌；

2-5）進行熒光檢測；

2-6）根據步驟1）繪制的標準曲線，根據檢測到的熒光猝滅值計算待測樣品中雙酚A和/或雌二醇的濃度。