[發(fā)明專利]基于上轉(zhuǎn)換熒光免疫傳感器的阿特拉津檢測試劑盒及應(yīng)用和阿特拉津檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810283165.2
• 申請日: 2018-04-02
• 公開（公告）號: CN108535483B
• 公開（公告）日: 2021-04-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王江;高志賢;白家磊;彭媛;任舒悅;李雙;寧保安
• 申請（專利權(quán)）人: 軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院環(huán)境醫(yī)學(xué)與作業(yè)醫(yī)學(xué)研究所
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/543;G01N33/533;G01N21/64
• 代理公司: 北京思創(chuàng)大成知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11614
• 代理人: 高爽

1.一種基于上轉(zhuǎn)換熒光免疫傳感器的阿特拉津檢測試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括以下組分：

(1)羧基化核/殼型上轉(zhuǎn)換納米顆粒NaYF₄:Yb,Er@NaYF₄:Nd；所述羧基化核/殼型上轉(zhuǎn)換納米顆粒的粒徑為350-400nm；

(2)抗阿特拉津單克隆抗體；

(3)黑磷納米金復(fù)合材料分散液；

所述羧基化核/殼型上轉(zhuǎn)換納米顆粒和所述抗阿特拉津單克隆抗體以羧基化核/殼型上轉(zhuǎn)換納米顆粒偶聯(lián)抗阿特拉津單克隆抗體的形式提供；

其中，所述羧基化核/殼型上轉(zhuǎn)換納米顆粒通過包括以下步驟的方法制備：

(1)合成上轉(zhuǎn)換納米顆粒內(nèi)核：將氧化釔、氧化鐿、氧化鉺分別與三氟乙酸反應(yīng)，制得三種三氟乙酸化物，然后將三種三氟乙酸化物與三氟乙酸鈉、油酸、1-十八烯和油胺混合反應(yīng)，制得所述上轉(zhuǎn)換納米顆粒內(nèi)核；

(2)制備核/殼型上轉(zhuǎn)換納米顆粒：將所述上轉(zhuǎn)換納米顆粒內(nèi)核分散于有機(jī)溶劑中，加入三氟乙酸鈉、三氟乙酸釔、三氟乙酸釹、油酸、1-十八烯進(jìn)行反應(yīng)，制得所述核/殼型上轉(zhuǎn)換納米顆粒；

(3)制備羧基化核/殼型上轉(zhuǎn)換納米顆粒：將聚丙烯酸溶液與核/殼型上轉(zhuǎn)換納米顆粒混合，制得所述羧基化核/殼型上轉(zhuǎn)換納米顆粒；

其中，所述黑磷納米金復(fù)合材料分散液通過如下方法制得：將黑磷晶體粉末與聚乙烯吡咯烷酮水溶液混合，超聲條件下進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)后離心去除未剝離完全的黑磷晶體沉淀，得到黑磷納米片；將黑磷納米片洗凈后超聲分散于水中，加入氯金酸水溶液，震蕩混合反應(yīng)，離心去上清，清洗沉淀后分散于水中，得到所述黑磷納米金復(fù)合材料分散液。

2.權(quán)利要求1所述的阿特拉津檢測試劑盒在檢測阿特拉津中的應(yīng)用。

3.一種基于上轉(zhuǎn)換熒光免疫傳感器的阿特拉津檢測方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

1)建立阿特拉津標(biāo)準(zhǔn)曲線：

1-1)將羧基化核/殼型上轉(zhuǎn)換納米顆粒偶聯(lián)抗阿特拉津單克隆抗體用封閉液封閉，離心去上清后用PBS溶液洗滌，復(fù)溶于PBS溶液中；

1-2)加入多個濃度梯度的阿特拉津標(biāo)準(zhǔn)品溶液，震蕩孵育；

1-3)離心去除未連接的小分子，用PBS溶液反復(fù)洗滌，復(fù)溶于PBS溶液中；

1-4)加入黑磷納米金復(fù)合材料分散液，劇烈震蕩反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后離心，用PBS溶液洗滌，除去未連接的黑磷納米金；

1-5)加入PBS溶液，進(jìn)行熒光檢測，繪制阿特拉津標(biāo)準(zhǔn)品的濃度與熒光猝滅值的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

2)待測樣品中阿特拉津的檢測：

2-1)將羧基化核/殼型上轉(zhuǎn)換納米顆粒偶聯(lián)抗阿特拉津單克隆抗體用封閉液封閉，離心去上清后用PBS溶液洗滌，復(fù)溶于PBS溶液中；

2-2)加入含有阿特拉津的待測樣品，震蕩孵育；

2-3)離心去除未連接的小分子，用PBS溶液反復(fù)洗滌，復(fù)溶于PBS溶液中；

2-4)加入黑磷納米金復(fù)合材料分散液，劇烈震蕩反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后離心，用PBS溶液洗滌，除去未連接的黑磷納米金；

2-5)加入PBS溶液，進(jìn)行熒光檢測；

2-6)根據(jù)步驟1)繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)檢測到的熒光猝滅值計(jì)算待測樣品中阿特拉津的濃度。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中，所述多個濃度梯度的阿特拉津標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度范圍為0.01-1000ng/mL。